谭光明 唐云姣 林丽娟 黄彩霞

（1.德保县动物疫病预防控制中心，广西德保 533700；2.百色市动物疫病预防控制中心，广西百色 533000）

猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病是近年来危害养猪业的三大主要动物疫病。我国将其都列为一类动物疫病，并且列入政府重点防控的重大动物疫病强制免疫病种。虽然2017年1月1日起，猪瘟、高致病性猪蓝耳病国家退出强制免疫，但是这两种疫病及猪口蹄疫的免疫注射依然是猪病防控工作的重点，特别在农村条件落后的散养户免疫注射工作仍然是防控的首要条件，然而猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病这三种疫病的传统免疫方式每头猪免疫次数多，对基层兽医人员的工作量大，免疫工作落实难。为了进一步做好生猪这三种疫病的防控工作，探索合理有效的免疫方式，既减轻工作量，提高工作效率，又能确保免疫效果，寻找适合德保县农村养殖模式的生猪免疫程序，2017年春防期间，我们进行了两种不同免疫方式的对比试验，第一种是传统的免疫方式即先同时经双侧颈部肌肉注射猪口蹄疫和猪瘟疫苗，14d后再经颈部肌肉注射高致病性猪蓝耳病疫苗，简称“三苗三针两免”；第二种是新的免疫方式即将猪瘟疫苗和高致病性猪蓝耳病疫苗分别等量稀释后混合为1针，注射到猪耳后颈部一侧，另一侧同时注射猪口蹄疫疫苗，简称“三苗两针一免”。本对比试验采用这两种不同免疫方试免疫后的猪，通过免疫副反应观察以及两次抗体检测效果比较分析，得出“三苗两针一免”新的免疫方式既省时省力，又能使免疫抗体水平达到国家规定的群体保护标准，可在农村散养户推广应用，现将情况报告如下。

1 实验材料

1.1 试验动物

在巴头乡念印村李某猪场、敬德镇扶平村黄某猪场、都安乡凌雷村许某猪场各选择45～60日龄未免疫过猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病疫苗的健康仔猪各20头，共60头。

1.2 疫苗

（1）猪口蹄疫O型灭活疫苗，中牧实业股份有限公司生产，生产批号：1610002；生产日期：20161013；有效期至：20171014。

（2）猪瘟活疫苗，中博生物股份有限公司生产，生产批号：20160607；生产日期：20160622；有效期至：20180623。

（3）高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（TJM-F92株），吉林特研生物技术股份有限责任公司生产，生产批号：20161004；生产日期：20160405；有效期至：20180404。

1.3 诊断试剂

（1）口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒，中国农业科学院兰州兽医研究所生产，批号20170307101-6；有效期至：20170906。

（2）猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒，武汉科前生物股份有限公司生产，生产批号：160812；有效期至：170621。

（3）猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒，武汉科前生物股份有限公司生产，批号：170302；有效期至：180122。

1.4 试验主要仪器

（1）小型通用离心机TGL-16GB，上海安亭科学仪器厂制造。

（2）生化培养箱spx-1508-z型，上海博迅实业有限公司医疗设备厂。

（3）酶标分析仪Rt-6100，深圳雷杜生命科学股份有限公司。

（4）单道微量加样器20～200μl，多道微量加样器20～200μl，德国公司生产。

2 实验方法

2.1 试验分组与免疫方案

在巴头乡念印村李某猪场选择20头分成A组和B组、敬德镇扶平村黄某猪场选择20头分成C组和D组、都安乡凌雷村许某猪场选择20头分成E组和F组，实验猪每组10头，总共6个组。所选择的猪均为健康状况良好，饲养条件相当，45～60日龄，并且未经过猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病免疫仔猪。其中A、C、E组采用“三苗三针两免”免疫方式，即先同时经双侧颈部肌肉注射猪口蹄疫和猪瘟疫苗，14d后再经颈部肌肉注射高致病性猪蓝耳病疫苗，接种疫苗剂量严格按说明书使用，猪瘟、高致病性猪蓝耳病疫苗按每头份加1ml生理盐水稀释，每头1ml，猪口蹄疫每头2ml；B、D、F组采用“三苗两针一免”免疫方式，即将猪瘟疫苗和高致病性猪蓝耳病疫苗分别等量稀释后混合为1针，注射到猪耳后颈部一侧，另一侧同时注射猪口蹄疫疫苗。接种疫苗剂量严格按说明书使用，猪瘟、高致病性猪蓝耳病疫苗各按每头份加1ml生理盐水稀释后混合，每头2ml，猪口蹄疫每头2ml。

2.2 采样方案

对6个实验组的猪在免疫后28d、35d经前腔静脉各采集血清样品一次，两次采集血清样品共120份，样品采集由县动物疫病预防控制中心和乡镇站技术员共同完成，县动物疫病预防控制中心负责对血清样品进行抗体检测。

2.3 抗体检测方法

O型口蹄疫抗体检测方法为液相阻断ELISA试验，具体操作按试剂盒说明书进行，判定标准：抗体效价≥1：128判为抗体阳性，抗体效价<1：64判为抗体阴性；猪瘟抗体检测方法为阻断ELISA试验，具体操作按试剂盒说明书进行，判定标准为：阴性对照的平均OD630nm大于0.500，阳性对照的阻断率均大于50%，被检样品的阻断率≤30%，该样品判为抗体阴性，被检样品的阻断率≥40%，该样品判为抗体阳性；高致病性猪蓝耳抗体检测方法为血清学ELISA试验，具体操作按试剂盒说明书进行，判定标准为：阳性对照OD630nm值均≥0.8，阴性对照OD630nm值均<0.3，KQ≥20判为阳性，KQ<20判为阴性。试验检测过程和结果判定严格按照ELISA检测试剂说明操作。

3 结果分析

3.1 免疫副反应观察结果

各组试验猪经疫苗注射后加挂免疫标识，做好登记，并且注射后48h内逐头观察精神、食欲、呼吸、体温、口吐白沫、抽搐、休克死亡等免疫副反应情况。经免疫后观察统计，应用“三苗三针两免”免疫方式的有都安乡凌雷村许某猪场1头免疫后第1d食欲减退，第3d恢复正常，其余的实验猪无异常；应用“三苗两针一免”免疫方式的有巴头乡念印村李某猪场1头免疫后第1d食欲减退，第2d恢复正常，其余的实验猪无异常。两种免疫方式的副反应差异不显著。

3.2 免疫抗体检测结果

应用“三苗三针两免”传统免疫方式与“三苗两针一免”新的免疫方式免疫后的6个实验组的猪进行抗体检测阳性率相比。结果，猪口蹄抗体检测阳性率应用“三苗两针一免”的比“三苗三针两免”一样，差异不显著；猪瘟抗体检测阳性率应用“三苗两针一免”的比“三苗三针两免”高1.7个百分点，差异不显著；高致病性猪蓝耳抗体检测阳性率应用“三苗两针一免”的比“三苗三针两免”低1.7个百分点，差异不显著。试验结果两种免疫方式的猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病免疫抗体群体合格率都高于75%以上（见表1、2）。

4 小结与讨论

（1）本试验免疫后只进行两次抗体监测，对于抗体达到高峰时间、消长时间规律还要进一步的实验和研究。

（2）从本对比试验看应用两种不同免疫方式免疫后的猪，免疫副反应无明显的差异，免疫抗体水平都达到国家规定的群体保护标准70%以上。

（3）从本对比试验看应用两种不同免疫方式免疫后的猪，通过两次抗体监测结果比较分析表明，两种免疫方式在免疫28d后免疫抗体水平均达到国家规定的群体免疫合格标准，并且免疫抗体阳性数和阳性率逐渐增高，35d后采样监测抗体都达到了较高。

（4）从本对比试验看应用两种不同免疫方式免疫后结果分析，“三苗三针两免”免疫方式在同等的情况下高致病性猪蓝耳病还存在一段时间的抗体空白。并且所用的时间、人力、财力都相对高；“三苗两针一免” 免疫方式既省时、省力，可减少基层兽医人员防疫工作量，又能确保免疫效果，进一步提高了工作效率。相比，新的“三苗两针一免”免疫方式优于传统的“三苗三针两免”免疫方式。

表1 猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳三种疫苗应用不同免疫程式抗体检测结果统计表

表2 猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳三种疫苗应用不同免疫程式抗体检测阳性率汇总表

（5）从本试验免疫效果检测结果分析，巴头乡念印村李某猪场应用“三苗两针一免”免疫方式的B组高致病性猪蓝耳病免疫合格数和免疫抗体群体合格率低于其他组，可能是因为免疫注射4d后畜主自行进行阉割造成应激反应。德保县的部分动物防疫员平时习惯在免疫注射疫苗时同时进行阉割，导致抗体效价相对较低，因此，建议免疫注射疫苗不应与阉割同时进行。

（6）从本试验看，在防疫人员在进行猪瘟、高致病性猪蓝耳病疫苗的等量稀释时，会存在一定的差异，可能会对免疫效果造成一定的影响。如果能研制出一种猪瘟和高致病性猪蓝耳二联苗，这将对猪瘟和高致病性猪蓝耳病的防控有着重要作用。

综上所述，“三苗两针一免”免疫方式，既减少免疫次数，又能确保免疫抗体水平达到国家规定的群体保护标准，是一项可行的免疫新技术，可在农村散养户推广应用。

[1]胡杰，张步娴.不同免疫方式对仔猪高致病性猪蓝耳病、猪瘟、猪 口蹄疫三种疫苗抗体水平的影响[J].中国动物传染病学报，2014，22（5）：61-67.

[2]黄崇元，白春兰.西双版纳州“321”免疫新技术与传统免疫抗体水平的比较[J].云南畜牧兽医，2015，（4）：41.