硫化氢预处理对扑热息痛引起肝损伤的保护作用

2018-04-02黄海进施洋仲艳阳陈大六焦峰

东南大学学报（医学版） 2018年1期

关键词：匀浆普外科预处理

黄海进，施洋，仲艳阳，陈大六，焦峰

(1.江苏淮安市洪泽区人民医院普外科，江苏淮安　223001；2.解放军第八二医院普外科，江苏淮安　223001)

为此，本研究拟通过APAP构建小鼠急性肝损伤模型，观察NaHS是否对APAP造成的肝脏损伤起保护作用，并对其机制进行初步探究。

1　材料和方法

1.1　实验动物

SPF级C57BL/6J小鼠20只，雄性，6～8周龄，体重20～25g,购置于上海斯莱克动物中心。

1.2　药品和试剂

1.3　方法

1.3.1构建实验动物模型成年的雄性C57BL/6J小鼠20只被饲养于SPF级环境中。将小鼠随机分为4组：正常组、APAP损伤组、NaHS预处理组以及单纯NaHS处理组。在APAP损伤前2 h，给NaHS预处理组以及单纯NaHS处理组的小鼠经腹腔注射NaHS(20 mg·kg-1)；2 h后，对APAP损伤组及NaHS预处理组的小鼠腹腔注射APAP(150 mg·kg-1)；APAP损伤8 h后处死小鼠，取血、取肝备用。

1.3.2肝脏组织匀浆的制备及总蛋白的提取取黄豆大小肝脏组织，加入1 ml裂解液(含1%PMSF)于研磨机中研磨制成组织匀浆。将制备好的组织匀浆置于冰上裂解30 min后，4 ℃ 12 000 rpm离心15 min。取上清。

1.4　统计学处理

统计采用SPSS 21.0软件。计量结果数据以均数±标准差，组间比较采用独立样本t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2　结　　果

2.1　NaSH对小鼠APAP损伤后血清ALT、AST的影响

相对于正常组小鼠，APAP损伤后小鼠ALT与AST的表达量明显升高(P<0.001)；然而在APAP损伤前采用NaSH预处理，可见小鼠血清ALT及AST的水平明显低于单纯APAP损伤的小鼠(P<0.001)；与此同时单纯采用NaSH处理的小鼠其血清ALT及AST的水平与正常小鼠之间不存在统计学上的差异(图1)。

2.2　NaSH对小鼠APAP损伤后肝脏组织病理形态学的影响

结果显示正常组及单纯NaHS处理的小鼠肝脏结构清晰，肝小叶结构完整，肝细胞索围绕中央静脉呈放射状排列。而经过APAP损伤后，可见小鼠肝脏围绕中央静脉大片状的坏死灶；然而当NaSH预处理以后，APAP所造成的大面积坏死灶明显减轻，其组织结构更加接近于正常组的小鼠(图2)。

图1NaSH对APAP损伤后ALT、AST的影响
Fig1EffectofNaSHonALTandASTinmiceafterAPAPinjury

A.对照组；B.APAP损伤组；C.NaHS预处理组；D.单纯NaSH处理组
A.control group; B.APAP injury group;C.NaHS preconditioning group; D.simple NaSH treatment group
图2NaSH对APAP损伤后对各组小鼠肝脏组织结构的影响(scale bar=200 μm)
Fig2EffectofNaSHonlivertissuestructureofmiceafterAPAPinjury

2.3　NaSH对小鼠APAP损伤肝脏匀浆中凋亡相关蛋白表达的影响

图3NaSH对APAP损伤后对各组小鼠肝脏组织凋亡相关蛋白的表达的影响
Fig3EffectofNaSHontheexpressionofapoptosisrelatedproteininlivertissuesofmiceafterAPAPinjury

2.4　NaSH对小鼠APAP损伤肝脏匀浆中MAPK/JNK信号通路的影响

与正常组小鼠相比，在APAP作用下，小鼠肝内MAPK/JNK信号通路的激活明显增加；此外，相对于单纯APAP损伤的小鼠而言，NaSH预处理的小鼠肝脏内MAPK/JNK信号通路的激活情况要明显较低。(图4)。

图4NaSH对APAP损伤后对各组小鼠肝脏组织MAPK/JNK通路激活的影响
Fig4EffectofNaSHonactivationofMAPK/JNKpathwayinlivertissuesofmiceafterAPAPinjury

3　讨　　论

本文通过体外给予NaHS，证实了H2S对APAP肝损的保护作用以及可能的相关机制。为今后APAP肝损的治疗提供新的思路。而氧化应激、线粒体功能的异常、过氧化亚硝酸盐的形成、GSH的耗竭同样被报道在APAP损伤肝脏的过程中起到重要的作用。NaSH是否能够通过清除或者抑制上述有害物质的产生从而对肝脏起到保护作用？NaSH的应用是否会对机体产生不良的影响？这些都有待进一步实验加以研究。

[参考文献]