张瑞涛，史惠蓉，任　芳，王文文，姬鹏程，刘传娜，陈　晨

郑州大学第一附属医院妇产医学部 郑州 450052

恶性肿瘤的发生是一个多步骤的复杂过程，细胞周期调节异常和信号通路传导异常与大多数恶性肿瘤的发生发展密切相关[1]。细胞周期G2/M检验点是细胞进入有丝分裂前修复DNA损伤的重要关卡，细胞周期依赖激酶1(cyclin dependent kinases 1， CDK1)是细胞周期G2/M期调控传导网络中的核心因子[2-3]。研究[4-10]表明，在喉癌、食管癌、肺癌、肝癌、结直肠癌、肾癌和卵巢癌等多种癌组织中均检测到CDK1的高表达，其高表达与上述恶性肿瘤的预后有关，CDK1可能在上述恶性肿瘤的发生发展中发挥重要作用。本课题利用shRNA干扰技术研究检查点激酶1(check-point kinase 1,CHK1)-CDK1信号通路介导的G2/M检验点在卵巢上皮性癌SK-OV-3、OVCAR-3细胞增殖和凋亡中的作用，现将结果报道如下。

1　材料与方法

1.1主要材料人上皮性卵巢癌细胞株SK-OV-3、OVCAR-3购自中国典型培养物保藏中心(武汉大学保藏中心)，RPMI 1640完全培养基购自美国HyClone公司。鼠抗人CDK1单克隆抗体、鼠抗人CyclinB1单克隆抗体、兔抗人磷酸化CDK1(Thr14/Tyr15)多克隆抗体、鼠抗人CHK1单克隆抗体、山羊抗人磷酸化CHK1(ser345)多克隆抗体、鼠抗人CDC25C单克隆抗体、山羊抗人磷酸化CDC25C(ser216)多克隆抗体、山羊抗人Ki-67多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司。鼠抗人PCNA单克隆抗体、兔抗人Caspase8多克隆抗体、鼠抗人Cleaved-Caspase3单克隆抗体、WB及IP蛋白裂解液、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒购自江苏碧云天生物公司，增强化学发光(ECL)试剂盒、兔抗人β-actin单克隆抗体、鼠抗兔单克隆IgG均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。阴性对照shRNA 质粒、shRNA Plasmid Transfection Reagent为美国Santa Cruz公司产品，Trizol为美国Invitrogen公司产品，RevertAid First Strand cDNA合成试剂盒为加拿大Fermentas公司产品。……