张 谢，周 华，张宏宇，肖 健*

(1.宁波市医疗中心李惠利医院 药剂科， 浙江 宁波 315040； 2.温州医科大学 药学系， 浙江 温州 325035)

脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)是严重危害人类生存和生活质量的一类中枢性神经创伤。血脊髓屏障(blood spinal cord barrier, BSCB)的破坏将严重扰乱脊髓内环境稳态，是脊髓损伤后难愈的重要原因，是后续其他损伤机制相互联系、互相作用的重要通路和中心环节[1]。碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)，是一个具有神经保护作用的细胞因子[2- 3]。本研究旨在研究bFGF对体内BSCB的维护是否具有保护作用，并探讨其相关机制。

1 材料与方法

1.1 材料

药品与试剂 bFGF(中国格鲁斯特公司),p120-catenin、β-catenin、claudin- 5和occludin抗体(Abcam 公司)，羊抗兔 IgG-HRP(Bioworld公司),其他所有试剂(Sigma公司)。

SPF 级，SD大鼠，体质量为220～250 g [上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证号：SCXK(沪)2012- 0002]。在温州医科大学动物实验中心分笼饲养。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及处理：将动物随机分为3组，假手术组(sham)，模型组(SCI)腹腔内注射10%水合氯醛(3.5 mL/kg)麻醉，暴露脊柱 T8-10段，固定于打击器平台，撞击T9节段，打击器力度约150 kdyn，bFGF干预组(SCI+bFGF)术后30 min，背部给予bFGF(80 μg/kg)，之后每隔1 d给药1次，每组各6只，于术后14 d处死。

1.2.2 BBB评分观察大鼠后肢运动功能：根据BBB评分标准[4]，在脊髓损伤后1、3、7和14 d进行评分。评分采用双人双盲法，独立观察各组大鼠双后肢行动能力并记录。

1.2.3 动物组织处理及组织切片：腹腔注射10% 水合氯醛麻醉，先用0.9%氯化钠溶液快速冲洗，再用4%多聚甲醛灌注固定。剥取损伤脊髓T7-T10，然后将其置于15% 蔗糖溶液中4 ℃过夜，OCT包埋，液氮凝固，存于-80 ℃备用。组织切片：将包埋好的组织块在-20 ℃ 冰冻切片机内复温30 min，进行切片，厚度均为20 μm(用于伊文思蓝直接观察)或5 μm(用于HE染色，免疫荧光染色)，存于-20 ℃备用。……