廉 蕊 刘少卿 郑纪宁 代俊利*

结直肠癌(colorectal carcinoma，CRC)是消化道疾病中常见恶性肿瘤之一，是由遗传因素和环境因素的共同作用引起的，居常见恶性肿瘤的第4位，对人类的健康构成了严重的威胁。为提高患者的生存率，患者术后辅助化疗是必要的辅助治疗措施[1-2]。但是化疗药物治疗时的多药耐药性(multidrug resistance，MDR)是临床化疗常见的现象[3-5]。MDR是化疗失败的原因之一，MDR蛋白家族在化疗失败的所有机制中扮演着重要的角色[6]。本研究通过免疫组织化学检测多药耐药基因相关产物P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)、拓朴异构酶Ⅱ(topoisomerase Ⅱ，Topo-Ⅱ)在CRC组织中的表达情况，分析多药耐药基因相关产物在CRC发生发展中的表达情况，研究P-gp和Topo-Ⅱ与肿瘤生物学行为的关系以及P-gp和Topo-Ⅱ两者表达的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2014年2月至2016年2月经承德医学院附属医院病理科确诊为CRC的100例患者结直肠黏膜组织标本，其中高分化和中分化标本64例，低分化和未分化标本36例；另收集40例正常结直肠黏膜组织标本。所有CRC患者在术前均未行放射治疗或者化疗，患者的相关临床及病理资料完整。

1.2 材料与试剂

兔抗人P-gp多克隆抗体(一抗，工作浓度1∶100)及兔抗人Topo-Ⅱ多克隆抗体(一抗，工作浓度1∶120)、免疫组织化学试剂盒(内含DAB显色剂)皆购自北京中杉金桥生物技术公司。

表2 在100例CRC组织中P-gp和Topo-Ⅱ的表达及生物学行为的相关因素

1.3 免疫组织化学法

采用免疫组化链霉亲和素-过氧化物酶(streptavidin peroxidase，SP)法[7]均按照免疫组织化学试剂盒说明操作，然后加一抗后4 ℃过夜，用已知的阳性CRC切片组织为阳性对照，将用磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution，PBS)代替一抗作为阴性对照。……