杨万风，刘 艳，陆辰晨，邵沛泽，谌运清，赵文军

(1.连云港出入境检验检疫局，江苏 连云港 222042； 2.连云港市农业科学院，江苏 连云港 222001； 3.中国检验检疫科学研究院，北京 100029)

菊基腐病菌[1](Erwiniachrysanthemi)和洋葱腐烂病菌[2-3](Burkholderiagladiolipv.alliicola)是引起郁金香软腐病的重要细菌。这2种病原菌因其在国外发生分布广、定殖风险高、经济危害大，已被中国出入境机构列为进境植物检疫性有害生物。近年来，国内花卉消费快速增长，我国进口郁金香种球呈逐年增长态势。国外郁金香主产国多数是这2种病菌的疫区，因此这2种病菌随进口郁金香种球传入我国的风险较大。目前，国内种苗指定口岸对细菌的检测多数仍采用传统的分离培养和生化鉴定方法，鉴定时间较长，影响快速通关。因而，建立快速实用、准确灵敏、操作简便的分子检测技术对控制病菌的传入具有重要意义。

目前，对这2种细菌的分子检测技术已有不少报道。国内外不少学者已初步建立了洋葱腐烂病菌的常规PCR检测方法[2-4]。Lee等[5]运用RFLP和PFGE方法分析了台湾的菊基腐病菌；刘鹏等[6]设计了专化性引物，鉴定了菊基腐病菌。但是上述研究均只检测1种细菌，同步检测上述2种细菌的分子检测方法还未见报道。双重PCR技术可在1次反应中同时检测2种病菌，大幅节约检测时间，提高检测效率，降低检测成本。目前，该技术在植物病原物的检测应用中比较广泛[7-10]。

本研究根据洋葱腐烂病菌核糖体基因ITS序列设计特异性引物，与已发表的菊基腐病菌的专化性引物组合成双重PCR体系，对洋葱腐烂病菌和菊基腐病菌进行同步检测，以期提高种苗指定口岸检疫性细菌疫情检出率。……