倪 璞， 刘宏伟

(同济大学口腔医学院牙周教研室，上海 200072)

种子细胞是牙周组织工程成功的关键因素之一，牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells, PDLSCs)，牙周膜细胞(periodontal ligament cells, PDLCs)及躯干骨来源的骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)均被证明是牙周再生良好的种子细胞[1-3]。但种子细胞来源较少，培养难度较大，难以用于临床治疗。有外国学者利用骨髓充质干细胞(bone marrow mesenchymal stems, BMMSCs)培养液上清液制备琼脂糖凝胶，填入大鼠颅骨缺损，刺激骨缺损周围旁分泌因素，成功促进骨缺损的再生[4]。本实验选取不同种子细胞及BMMSCs细胞的培养液，比较这些培养液对SD大鼠牙周组织的修复效果，为进一步复杂的牙周组织工程的研究及临床应用提供基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物与仪器

同批次6周龄雄性SD大鼠(SPF级)，购自同济大学实验动物中心；低糖型DMEM培养基、胎牛血清、谷氨酰胺、青链霉素购自美国Gibco公司；0.25%胰蛋白酶、琼脂糖粉剂、CO2恒温孵箱购自美国Thermo公司；离心机购自德国Eppendorf公司；YJ-875型超净工作台购自苏州净化设备厂；倒置相差显微镜及照相系统购自日本Nikon公司；10cm培养皿及15、50mL离心管购自美国Corning公司。

1.2 方法

1.2.1 大鼠BMMSCs的培养 选取6周龄SD大鼠，予1%戊巴比妥钠0.006mL/g对大鼠行腹腔麻醉，75%乙醇浸泡5min，无菌条件下取出大鼠双侧股骨及胫骨，在无菌PBS中剥离多余组织，反复冲洗干净。剪开两端骨骼处，用5mL注射器抽取含10% FBS和1%双抗的低糖DMEM培养液从一端打入，冲出骨髓状物滴至含有同样培养液的10cm培养皿中，吹打成细胞悬液，置于5% CO2、37℃、95%饱和湿度的孵育箱中孵育。倒置显微镜下观察细胞生长情况。……