闫丽丽

摘要：综述枸杞中甜菜碱含量测定方法的研究进展，介绍薄层扫描法、高效液相色谱法、比色法、液相色谱-质谱联用法等分析测定条件、精密度、回收率，旨在为开展甜菜碱相关研究提供理论参考。

关键词：枸杞子；甜菜碱；含量测定；精密度；回收率

中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2017）09-0069-02

枸杞为茄科植物宁夏枸杞的干燥成熟果实，是传统的药食同源天然植物，具有滋补肝肾、益精明目的功效。现代研究表明，甜菜碱是枸杞的主要生物碱之一，具有降脂、抗癌、抗氧化等作用。甜菜碱是一种季铵型水溶性生物碱，易溶于水和甲醇，常温下极易吸湿潮解，因具有良好的生物活性及理化性质且无毒无害，因而被广泛用于化工制药、种植养殖及食品生产。目前，甜菜碱检测方法主要有薄层扫描法、高效液相色谱法、比色法、液相色谱-质谱联用法等。综述甜菜碱检测方法研究进展，为甜菜碱开发利用提供参考。

1 枸杞中甜菜碱含量测定方法

1.1 层扫描法

薄层扫描法是2015版《中国药典》（一部）中规定的枸杞子中甜菜碱含量测定方法。具体的检测方法为：甲醇回流提取后，用活性炭滤过，加硫氰酸铬铵溶液搅拌，再用垂熔漏斗滤过制得供试品溶液；对照品加盐酸甲醇溶液（0.5→100）制成每1 mL含4 mg的溶液；精密吸取供试品溶液5 μL、对照品溶液3 μL与6 μL，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮-无水乙醇-盐酸（10‥6‥1）为展开剂，预饱和30 min后展开，取出，挥干溶剂，立即喷新配制的改良碘化铋钾试液，放置1～3 h至斑点清晰，在波长515 nm，590 nm下扫描，测量供试品吸光度积分值与对照品吸光度积分值并计算。按干燥品计算，含甜菜碱（C5H11NO2）不得少于0.30%。

双波长薄层扫描法是指采用两种不同波长的光束，先后扫描所要测定的斑点，并记录下此两波长吸光度之差。对欲测斑点进行原位光谱扫描，根据斑点的吸收光谱选择最大吸收峰波长作为样品的测定波长λS；选择斑点吸收光谱的基线部分，为该化合物无吸收处的波长，即样品的参比波长λR。双波长扫描可使薄层背景不均匀性得到补偿，显著改善基线的平稳性和精度。

谭亮等通过优化枸杞子样品提取、脱色时间等前处理条件，建立测定不同来源枸杞子甜菜碱含量的双波长薄层扫描法（TLCS法）。使用80%甲醇和快速溶剂萃取仪（ASE350）提取枸杞子甜菜碱后，经活性炭脱色、雷氏盐沉淀、丙酮溶解沉淀，采用改进的薄层扫描法测定其含量，检测波长为530 nm，参比波长为625 nm。测定结果为：清晰的薄层色谱斑点无干扰；甜菜碱点样量在3.84～38.40 μg范围内时，线性关系良好，r=0.999 5；平均加样回收率为98.30%，RSD=2.55%（n=9）。

1.2 高效液相色谱法

高效液相色谱法具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度高等优点，是目前中药材含量测定中最常用的分析方法。

方丽等采用高效液相色谱法测定甜菜碱的含量，色谱柱选用Nucleodur Hilic（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%三乙胺（82‥18，用磷酸调pH至7），流速0.6 mL/min，检测波长196 nm。测定结果表明：甜菜碱在1.737～34.744 μg范围内线性关系良好，r=0.999 9，平均回收率为99.5%，RSD为1.5%。

刘增根等采用反相高效液相色谱法测定柴达木枸杞和黑果枸杞中甜菜碱的含量，色谱柱选用Hypersil NH2（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈∶水（83‥17，V/V）为流动相，流速0.7 mL/min，检测波长195 nm，柱温30 ℃，外标法定量。测定结果表明：甜菜碱线性范围为2.94～29.40 μg（r=0.998 7），枸杞和黑果枸杞的平均回收率（n=5）分别为98.57%和99.07%。

1.3 比色法

比色法通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量，具有简单、快速、灵敏等优点。

吴燕等建立比色法测定枸杞中甜菜碱含量的分析方法，采用活性炭脱色、雷氏盐沉淀、无水乙醚淋洗、70%丙酮溶解沉淀后，在525 nm波長处检测。分析结果表明，甜菜碱的线性范围为0.1～1.0 mg/mL，在0.1，0.2，0.5 mg/mL添加水平的回收率为108%～112%，相对标准偏差为2.3%～3.7%。

1.4 液相色谱-质谱联用法

液相色谱与质谱联机技术结合了色谱的高分离效能和质谱的高选择性、高灵敏度特点，广泛应用于中药材含量测定研究。

李元元等采用LC-MS-MS法测定宁夏枸杞子提取物中甜菜碱的含量，色谱柱选用氨基柱（2.1 mm×150 mm，3 μm），柱温35 ℃，流动相为乙腈-水（80‥20），流速为0.3 mL/min1，进样量5 μl。质谱条件为电喷雾离子源（ESI），正离子模式（Positive），多反应监测（MRM），干燥气350 ℃，雾化器压力50 psi，干燥气流速12 L/min，毛细管电压4 000 V，Agilent UV检测器，Agilent三重四级杆质子检测器。试验结果表明：甜菜碱线性范围为20～700 ng/mL，平均回收率为99.77%，RSD为2.1%（n=6）。

1.5 离子色谱法

离子色谱法是把离子交换色谱与高效液相色谱技术相结合，将改进后的电导检测器安装在离子交换树脂柱后面，以连续检测色谱分离的方法，主要用于测定各种离子含量，具有迅速、连续、高效、灵敏、重现性好等优点。

庄红艳等采用Thermofisher Ion Pac CS19（250 mm×4 mm）阳离子交换色谱柱和CG19（50 mm×4 mm）阳离子保护柱，以甲基磺酸（MSA）为流动相，等度洗脱，流速1.0 mL/min。测定结果表明：10 min内可完成枸杞中甜菜碱的分离检测；甜菜碱质量浓度为10～500 mg/L时，标准曲线具有良好的线性关系；最低检出限为1.8 mg/L；精密度良好，保留时间和峰面积的RSD（n=6）分别为0.15%和1.7%；枸杞和大枣的加样回收率在85.1%～93.4%之间（n=6），平均加样回收率分别为88.8%和89.7%；样品在室温下放置12 h仍稳定。endprint

1.6 高效液相色谱-蒸发光散射检测器法

高效液相色谱-蒸发光散射檢测器测定方法（HPLC-ELSD）适用于无紫外吸收或紫外末端吸收的样品检测。该法具有极大的优越性：响应值不依赖于样品的光学性质，不论具有何种官能团，所有样品检测几乎具有相同的响应分子，未知物和纯度测定比紫外检测更容易更准确。目前，该检测方法广泛应用于医药、食品、化工等行业。

刘灵卓等建立枸杞子中甜菜碱含量的HPLC-ELSD测定方法，采用Hypersil NH2色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-四氢呋喃-0.2%三氟乙酸（30‥60‥10），流速1.0 mL/min，柱温25 ℃。试验结果表明：甜菜碱进样量为1.28～12.80 μg时，色谱峰面积具有良好的线性关系（r=0.999 2）；平均加样回收率为98.60%，RSD为2.8%（n=6）；样品中甜菜碱的含量为0.528 1～1.205 4 mg/g。

梁景辉采用HPLC-ELSD测定枸杞子中甜菜碱的含量，色谱柱选用Venusil HILIC 丙基酰胺键合硅胶色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.2%冰醋酸溶液（87‥13）。测定结果表明：甜菜碱在0.403 6～5.045 μg范围内呈良好线性关系，Y=

1.542 5X+4.072 4，r=0.999 9，平均回收率101.57%，RSD=1.05%（n=6）。

2 结语

近年来，对枸杞子中甜菜碱含量测定的研究取得了较大进展，包括薄层扫描法、高效液相色谱法、比色法、液相色谱-质谱联用法等。然而，还需要通过大量试验进行深入研究，探索更为精准、快速的检测方法，为枸杞子资源的进一步开发利用提供理论基础。

参考文献

[1] 谭亮，冀恬，曹静亚，等.双波长薄层扫描法测定不同来源枸杞子中甜菜碱的含量[J].天然产物研究与开发，2014，26（3）：388-391.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2015.

[3] 刘增根，陶燕铎，邵赟，等.柴达木枸杞和黑果枸杞中甜菜碱的测定[J].光谱实验室，2012， 29（2）：694-697.

[4] 庄红艳，姜振邦，潘广文，等.离子色谱法测定枸杞子和大枣中甜菜碱含量[J].中华中医药杂志，2017（9）：65-70.

[5] 梁景辉，贾芙蓉，时璐.HPLC-ELSD测定枸杞子中甜菜碱的含量[J].中国处方药，2016（2）：32-33.

Abstract： The articlesummarized the research progress on the method fordeterminating betaine in lycium， and introduced analysis and determinating condition， precision and recovery by the methods including TLCS， HPLC， Colorimetryand LC-MSn.The purpose is to provide a theoretical reference for carrying out further correlation study of betaine.

Key words： lycium；betaine； content determination； precision； recoveryendprint