田占成，独军政，高闪电，杜晓悦，于瑞明，刘光远，罗建勋，殷 宏

（中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州730046）

环形泰勒虫TRAP-A蛋白酵母双杂交诱饵质粒的构建与鉴定

田占成，独军政，高闪电，杜晓悦，于瑞明，刘光远，罗建勋，殷 宏

（中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州730046）

为了筛选出环形泰勒虫TRAP蛋白在虫体入侵媒介蜱唾液腺过程中相互作用蜱源蛋白, 构建了能够用于酵母双杂交筛选系统的重组诱饵质粒pGBKT7-TRAP-A。本研究以环形泰勒虫裂殖体为材料，根据环形泰勒虫TRAP-A结构域的基因序列设计引物，经过PCR扩增获得576 bp的基因片段，将其连接到线性化载体 pGBKT7上。经双酶切鉴定和序列分析以及重组诱饵质粒在酵母双杂交系统中的自激活、细胞毒性及其表达情况检测，结果显示，本研究成功构建了酵母双杂交重组诱饵质粒pGBKT7-TRAP-A，构建的诱饵质粒对Y2HGold酵母菌无自激活活性和细胞毒性，且构建的诱饵质粒pGBKT7-TRAP-A可以在Y2HGold酵母菌内正确表达。表明所构建的诱饵质粒pGBKT7-TRAP-A可以用于筛选小亚璃眼蜱唾液腺酵母双杂交cDNA文库，获得可能与环形泰勒虫TRAP-A蛋白相互作用的蜱源蛋白。

酵母双杂交系统；环形泰勒虫；TRAP-A蛋白；自激活；细胞毒性

血小板反应相关粘附蛋白（thrombospondin—related adhesive protein，TRAP）是一种Ⅰ型跨膜蛋白，由胞外的血小板结合蛋白样结构域（thrombospodin-like domain，TSR）和或整合素A样结构域（integrin A-like domain）、跨膜区和胞质尾部结构域（cytoplasmic tail domain，CTD）组成[1,2]，是由多基因编码的大家族，属于微线体蛋白。……