李洋丽　　潜丽俊

[摘要] 目的 探討儿童脓毒症患者治疗前后氧化应激及肠黏膜通透性的变化。 方法 选取2016年1月～2017年12月在该院住院治疗的儿童脓毒症患者40例为观察组，予以抗感染、液体复苏、营养支持和原发病治疗等基础治疗。观察治疗前和治疗7 d后血清氧化应激指标[活性氧（ROS）、脂质过氧化氢（LHP）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）]和肠黏膜通透性指标[内毒素和二胺氧化酶（DAO）]水平的变化。另选择同期在该院体检的正常健康儿童30例为对照组。 结果 观察组治疗前血清ROS和LHP水平明显高于对照组，血清GSH-Px水平明显低于对照组（P<0.05）。治疗7 d后，血清ROS和LHP水平较治疗前明显下降，血清GSH-Px水平较前明显上升（P<0.05）。同时观察组治疗前血清内毒素和DAO水平明显高于对照组（P<0.05）。治疗7 d后，血清内毒素和DAO水平较治疗前明显下降（P<0.05）。 结论 儿童脓毒症患者体内存在氧化应激紊乱及肠黏膜通透性异常，在其诊断和治疗中起重要作用。血清ROS、LHP、GSH-Px、内毒素和DAO水平的变化可作为儿童脓毒症患者疗效评价的敏感血清学指标。

[关键词] 脓毒症；儿童；氧化应激；肠黏膜通透性

[中图分类号] R725.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2018）32-0058-04

Changes of oxidative stress and intestinal mucosal permeability in children with sepsis

LI Yangli QIAN Lijun

Department of Pediatrics， Lishui Center Hospital in Zhejiang Province， Lishui 323000， China

[Abstract] Objective To investigate the changes of oxidative stress and intestinal mucosal permeability in children with sepsis before and after treatment. Methods 40 patients with sepsis who were hospitalized in the hospital from January 2016 to December 2017 were selected as the observation group and were given basic treatment such as anti-infection， fluid resuscitation， nutritional support， and primary disease treatment. The changes of serum oxidative stress parameters （reactive oxygen species （ROS）， lipid hydroperoxide （LHP） and glutathione peroxidase （GSH-Px）） and intestinal mucosal permeability indexes （endotoxin and diamine oxidase （DAO）） before treatment and after 7 days of treatment were observed. Another 30 normal healthy children who were examined in the same hospital during the same period were selected as the control group. Results The serum ROS and LHP levels in the observation group were significantly higher than those in the control group， and the serum GSH-Px level in the observation group was significantly lower than that in the control group（P<0.05）. After 7 days of treatment， serum ROS and LHP levels were significantly lower than those before treatment， and serum GSH-Px level was significantly higher than that before（P<0.05）. At the same time， serum endotoxin and DAO levels in the observation group were significantly higher than those in the control group before treatment（P<0.05）. After 7 days of treatment， the levels of serum endotoxin and DAO were significantly lower than those before treatment（P<0.05）. Conclusion There are oxidative stress disorders and intestinal permeability abnormalities in children with sepsis， which play an important role in diagnosis and treatment. The changes of serum ROS， LHP， GSH-Px， endotoxin and DAO levels can be used as sensitive serological markers for evaluating the efficacy of sepsis in children.

[Key words] Sepsis； Children； Oxidative stress； Intestinal mucosa permeability

膿毒症是儿童较常见的感染性疾病，其病情危重，进展较迅速，可引起感染性休克和多器官功能衰竭，死亡率较高[1-3]。脓毒症的致病机制十分复杂，最新研究发现氧化应激引起的氧自由基损伤及肠黏膜屏障引起的肠黏膜通透性变化在其发病中作用越来越受重视[4，5]。氧自由基损伤及肠黏膜通透性直接测定均较困难，多采用间接血清学指标评估，目前常用的氧自由基损伤指标包括活性氧（Reactive oxygen species，ROS）、脂质过氧化氢（Lipid hydrogen peroxide，LHP）和谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）；目前常用的评估肠黏膜通透性指标为内毒素和二胺氧化酶（Diamine oxidase，DAO）[6，7]。本研究分析了儿童脓毒症患者治疗前后氧化应激指标（ROS、LDH和GSH-Px）和肠黏膜通透性指标（内毒素和DAO）水平的变化，并与正常健康儿童相比较，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月～2017年12月我院住院治疗的儿童脓毒症患者40例为观察组。纳入标准：①符合中华医学会儿科学分会2005年制订的的相关诊断标准[8]；②发病时间<24 h，年龄4～14岁；③预计生存时间>1周。排除标准：①糖尿病或糖耐量减低患儿；②脓毒症休克及预计生存时间<1周的患儿；③免疫功能低下或长期使用免疫抑制剂者。另选择同期在我院体检的正常健康儿童30例为对照组。两组儿童的性别构成、年龄分布、体重等差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 治疗方法

观察组患儿予以广谱抗生素抗感染治疗（亚胺培南/西司他丁0.015 g/（kg·m2），q6～8 h）、补充液体（晶体液/胶体液=3：1）复苏、营养支持和原发病治疗等基础治疗。观察患儿治疗前和治疗7 d后血清氧化应激指标（ROS、LHP和GSH-Px）和肠黏膜通透性指标（内毒素和DAO）的变化。对照组儿童仅在纳入研究时测定血清ROS、LHP、GSH-Px、内毒素和DAO指标水平。

1.3 观察指标

1.3.1 标本采集 取患儿静脉血约3～5 mL，2500 r/min离心机低温离心15 min分离出血清并进行分装，冻存于-70℃冰箱备用。

1.3.2 血清ROS、LHP和GSH-Px水平测定 采用贝克曼库尔特AU680全自动生化仪测定血清ROS和LHP水平，采用硫代巴比妥酸比色法测定GSH-Px水平，试剂盒由上海宝曼生物公司提供，严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.3.3 血清内毒素和DAO水平测定 分别采用鲎试剂动态比浊法和联免疫吸附法测定血清内毒素和DAO水平，试剂盒分别由厦门市鲎试剂公司和南京建成科技公司提供，严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.4 统计学方法

采用SPSS19.0软件进行数据的统计分析处理，组间比较采用成组t检验，观察组治疗前后组内比较采用配对t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组治疗前后血清ROS、LHP和GSH-Px水平比较

观察组治疗前血清ROS和LHP水平明显高于对照组，血清GSH-Px水平明显低于对照组（P<0.05）。治疗7 d后，血清ROS和LHP水平较治疗前明显下降，血清GSH-Px水平较前明显上升（P<0.05）。

2.2 两组治疗前后血清内毒素和DAO水平比较

观察组治疗前血清内毒素和DAO水平明显高于对照组（P<0.05）。治疗7 d后，血清内毒素和DAO水平较治疗前明显下降（P<0.05）。

3 讨论

近年来氧化应激，尤其是氧自由基损伤在儿童脓毒症病因及发病机制中扮演重要角色[9，10]。脓毒症继发于各种严重感染，大量炎症因子对组织器官造成损伤；同时激活肾素-血管紧张素系统导致能量代谢障碍。脓毒症发生后，大量炎症因子释放入血并活跃氧化应激过程，使得氧代谢产物ROS、LH过度产生，进而导致线粒体ATP产生不足，细胞能量衰竭出现。氧化应激是脓毒症多脏器损伤的根本机制之一，也可客观衡量脓毒症病情严重程度；GSH-Px可使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物，促进过氧化氢的分解，使细胞膜的结构及功能免受过氧化物的损害。因此，ROS和LHP水平变化反应机体清除氧自由基能力，GSH-Px水平变化可反应机体抗氧自由基的能力，因此，ROS、LHP和GSH-Px水平变化可作为评估氧化应激的指标[11-14]。

本研究发现观察组患儿血清ROS和LHP水平高于对照组，血清GSH-Px水平低于对照组，且治疗7 d后，观察组血清ROS和LHP水平较前明显下降，血清GSH-Px水平较前明显上升。提示儿童脓毒症患者体内存在氧化应激紊乱，在其诊断和治疗中起重要作用。血清ROS、LHP和GSH-Px水平的变化可作为儿童脓毒症患者疗效评价的敏感血清学指标。

研究发现，肠源性内毒素血症以及其引起肠黏膜通透性上升在脓毒症发病整个过程中起着及其重要的作用[15-17]。脓毒症过程中最易受累的器官是胃肠道，而胃肠道抵御脓毒症攻击最重要的结构即为肠黏膜屏障，对肠黏膜屏障功能的保护在脓毒症的防治中起着关键的作用。脓毒症的病原体常为革兰阴性杆菌，其繁殖后可大量分泌内毒素形成内毒素血症；加上脓毒症患者交感-肾上腺髓质系统兴奋性上升，使得肠黏膜中的毛细血管收缩和血流供应量明显减少，导致肠黏膜缺血缺氧性改变，而且肠黏膜绒毛顶端上皮脱落，上皮细胞旁的路径明显增加，导致肠黏膜结构和功能受损，肠道黏膜的通透性明显增加，损害肠屏障功能及黏膜上皮细胞，内毒素及细菌大量移位进入血循环，刺激巨噬细胞及单核细胞、释放大量炎性介质及细胞因子引发炎症因子级联效应、进一步诱发肠黏膜功能障碍，形成恶性循环[18，19]。肠黏膜通透性常采用间接血清指标测定，常用有内毒素和DAO。当肠黏膜通透性上升时，内毒素和DAO经受损肠黏膜大量进入血液中引起其水平明显升高，因此，血清内毒素和DAO指标可评估判断肠黏膜的通透性和肠黏膜屏障受损情况，能更好的预测脓毒症患者病情的程度及患者的死亡率[20-21]。

本研究示观察组患儿治疗前血清内毒素和DAO水平明显高于对照组。治療7 d后，血清内毒素和DAO水平较治疗前明显下降。提示儿童脓毒症患者体内存在肠黏膜通透性异常，在其诊断和治疗中起重要作用。血清内毒素和DAO水平的变化可作为儿童脓毒症患者疗效评价的敏感血清学指标。

总之，儿童脓毒症患者体内存在氧化应激紊乱及肠黏膜通透性异常，在其诊断和治疗中起重要作用。血清ROS、LHP、GSH-Px、内毒素和DAO水平的变化可作为儿童脓毒症患者疗效评价的敏感血清学指标。

[参考文献]

[1] Vassiliou AG，Mastora Z，Jahaj E，et al. Does serum lactate combined with soluble endothelial selectins at ICU admission predict sepsis development？[J].In Vivo，2015， 29（2）：305-308.

[2] Antonopoulou A，Giamarellos-Bourboulis，EJ. Immunomodulation in sepsis state of the art an d future perspective[J].Immunotherapy，2011，3（1）：117-128.

[3] Warren L，Leea W，Conrad L. Endothelial activation，dysfunction and permeability during severe infections[J].Curr Opin Hematol，2011，18（2）：191-196.

[4] Ndengele MM，Muscoli C，Wang ZQ，et al.Superoxide potentiates NF-kappaB activation and modulates endotoxin-induced cytokine production in alveolar macro-phages[J].Shock， 2005， 23（2）：186-193.

[5] 骆建军，方强，方雪玲，等.脓毒症患者肠道黏膜通透性的临床研究[J].中国急救医学，2007， 27（9）：789-792.

[6] Wilson JX.Mechanism of action of vitamin C in sepsis：Ascorbate modulates redox signaling in endothelium[J]. Biofactors，2009，35（1）：5-13.

[7] Dellinger RP，Levy MM，Rhodes A，et al.Surviving Sepsis Campaign：International guidelines for management of severe sepsis and septic shock，2012[J]. Intensive Care Med，2013， 39（2）：165-228.

[8] 中华医学会儿科学分会急救学组，中华医学会急诊学分会儿科组，中华儿科杂志编辑委员会. 儿科感染性休克（脓毒性休克）诊疗推荐方案[J].中华儿科杂志，2006，44（8）：596-598.

[9] Heo JM，Rutter J.Ubiquitin dependent mitochondrial protein degradation[J]. Int J Biochem Cell Biol，2011，43（10）：1422-1426.

[10] Vicor M.Victor，Juan V.Esplugues，Antonio Hernandez Mijaresl， et al. Oxidative stress and mitochondrial dysfunction in sepsis：APotential therapy with mitochondria targeted antioxidants[J].In fectious Disorders Drug Targets，2009，9（2）：376-389.

[11] Murphy MP.How mitochondria produce reactive oxygen species[J]. Biochem，2009，417（1）：1-13.

[12] 刘科，刘晓丽. 脓毒症与氧化应激损伤研究进展[J].现代诊断与治疗，2014，25（9）：1970-1973.

[13] 张晓云，陈荣剑，王占科.脓毒症氧化应激与抗氧化治疗研究进展[J].中华临床医师杂志（电子版），2014，8（12）：2350-2354.

[14] Martin GS. Sepsis，severe sepsis and septic shock：Changes in incidence， pathogens and outcomes[J].Expert Rev Anti Infect Ther，2012，10（6）：701-706.

[15] Lassalle P，Caires NDF，Portier L，et al. Endothelial cell specific molecule 1 is today a relevant marker of respiratory failure in sepsis and polytrauma patients[J].Crit Care，2012，16（3）：110.

[16] Buttenschoen K，Radermacher P，Bracht H. Endotoxin elimination in sepsis：Physiology and therapeutic application[J].Langenbecks Arch Surgm，2010，395（6）：597-605.

[17] 甘永雄.强化胰岛素治疗对脓毒症患者血清 D-乳酸及前降钙素水平的影响及疗效观察[J]. 中国微生态学杂志，2014，26（9）：1049-1051.

[18] 张纪兰. 胰岛素早期强化治疗对脓毒症患者血清内毒素、二胺氧化酶和D-乳酸指标的影响及疗效观察[J].中国微生态学杂志，2016，28（3）：294-301.

[19] Antonopoulou A，Giam arellos-Bourboulis EJ.Immuno-modulation in sepsis state of the art an d future perspective[J]. Immunotherapy，2011，3（1）：117-128.

[20] 石斌，郭鸿，张斌，等.强化胰岛素治疗对脓毒症病人肠黏膜通透性的影响[J].肠外与肠内营养，2010，17（1）：11-12，16.

[21] 梁秀云，莫诚航，蒙春华.脓毒症患者血浆内毒素的检测及临床意义[J].中华医院感染学杂志，2014，24（7）：1802-1803，1806.

（收稿日期：2018-05-30）