邓 慧, 张丽琳,黎瑞巧, 张 蕾, 黄金海

(天津大学生命科学学院，天津 300072)

CpG ODNs寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxy-nucleotieds,CpG ODNs)是含胞嘧啶和鸟嘌呤的二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸。大量研究证实，含有未甲基化CpG基序的细菌DNA或人工合成的寡聚脱氧核苷酸是一种强大的免疫激动剂。CpG ODNs能够直接激活pDC和B细胞，从而引发先天性和适应性免疫应答[1]。由CpG ODNs引发的级联反应能够间接诱导NK细胞、单核细胞、T细胞和巨噬细胞的成熟分化和增殖[2-6]。TLR9的激活可诱导B细胞产生IL-6、IL-12和趋化因子CXC并诱导B细胞表达IgM[7-9]。被CpG ODNs激活的B细胞可上调表达Fc的表达受体(FcR)和共刺激分子MHC Ⅱ类分子(CD40、CD80、CD86)[10-11]。CpG ODNs刺激的B细胞增殖并分化为浆细胞和记忆B细胞[12]。CpG ODNs作为免疫增强剂和疫苗佐剂一开始主要以小鼠和人为研究模型，2001年，Kamstrup S等[13]首次研究了CpG ODNs对猪PBMCs刺激的作用以及筛选出最适合猪的特异性基序ATCGAT。有研究表明，使用CpG ODNs作为免疫佐剂，可以增强仔猪对猪链球菌败血症疫苗(SSSK疫苗)的免疫应答，包括增强SSSK疫苗的特异性抗体滴度、淋巴细胞增殖，增强PBMCs上IFN-γ、IL-6、MHCⅡ和CD14的表达[14]。

为了筛选出能有效激活猪免疫系统的CpG ODNs的序列，设计并合成了7种引物[13]，包含CpG的寡聚核苷酸，并用其刺激猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)、猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)和猪外周血单核细胞(PBMCs)，检测3种细胞中多种细胞因子转录水平变化，同时还检测了经CpG ODNs处理后的IPEC-J2中病毒增殖的变化。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 CpG ODNs的设计与合成 总结人与小鼠的CpG ODNs的特征，结合最适合猪的CpG基序ATCGAT共设计合成了7条包含CpG单元的序列(部分硫代修饰)，引物由苏州金唯智生物科技有限公司合成(表1)。……