牛静伟，张勤生，王桂菊

1. 中国人民解放军第152中心医院消化内科，河南 平顶山 467000； 2. 河南中医药大学附属第二医院肝胆脾胃科； 3. 南阳南石医院病理科

肝细胞癌(hepatocellular cancer，HCC)表现出形态学、细胞和分子异质性[1]。最近的研究已经证明,癌细胞的一个亚群-癌症干细胞(cancer stem cells，CSCs)具有增殖、自我更新并促进肿瘤形成的能力[2]。肝CSCs能够通过一些表面标记物被富集，如CD13、CD24、CD90和CD133等[3-7]，且CD24能通过STAT3介导的Nanog调控作用促进肝CSCs的自我更新和致肿瘤性[4]。已有的研究[8]证明，转录因子Nanog是肝CSCs的一个独特标记物，且在肝CSCs自我更新过程中发挥重要的调控作用。然而，肝CSCs如何维持自我更新能力仍然未知。去乙酰化酶1(sirtuins，SIRT1)能催化脱去组蛋白和非组蛋白的乙酰基[9]。癌症中，SIRT1在恶性组织和细胞中持续上调表达，且已经证明其与癌症的快速进展和预后不良有关[10]。SIRT1在维持胚胎干细胞和造血干细胞自我更新过程中发挥重要作用，尤其是在应激条件下[11]。然而，SIRT1在肝CSCs更新中的作用仍然未知。本研究探讨了SIRT1在肝CSCs更新中的作用及相关分子机制，以期为肝癌的临床治疗提供思路。

1 材料与方法

1.1材料与仪器HEK-293FT细胞、稳定表达Nanog-GFP的Huh7细胞株由本实验室保存。恒温CO2培养(美国Thermo Fisher)、多功能酶标仪(美国BioTek公司)、流式细胞仪(美国BD公司)。

1.2主要试剂DMEM/F12 培养基、DMEM培养基均购自美国Gibco公司；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS，以色列BI公司)；胰蛋白酶、Polybrene均购自美国Sigma公司；细胞因子bFGF、EGF、HGF均购自美国Pepro Tech公司；B27(美国Gibco公司)；谷氨酰胺(上海生工)；青霉素、链霉素(美国Sigma公司)。完全培养基的成分如下：DMEM、质量浓度为100 g/L的胎牛血清、青霉素与链霉素(100 U/ml、100 μg/ml)；……