李晓丽 董佳慧 吉鸿超 佟虎成 王 欣

（1.承德市动物疫病预防控制中心，河北承德 067000；2.承德市畜禽水产品质量检验监测中心，河北承德 067000）

PCR（聚合酶链式反应）技术是一种体外基因扩增技术，该技术通过重复高温变性、低温退火、中温延伸等简单的3个温度循环，可在很短的时间内将极微量的靶核酸扩增上百万倍，得到大量特定目的基因片段，获得极高的检测敏感性[1]。其主要缺点为极易污染，极微量的污染即可造成假阳性的结果，且处理起来非常麻烦。本文结合本实验室污染的发生及处理情况，分析核酸实验室污染产生的途径及控制措施。

1 材料

1.1 仪器

全自动核酸提取仪（西安天隆TGuide S32），荧光PCR仪（Roche LightCycler 96）。

1.2 试剂

磁珠法核酸提取试剂（货号Q5308），中山大学达安基因股份有限公司荧光定量PCR试剂盒（批号：2017002）

2 方法

污染发生后，对实验室进行污染监测，查找污染源，针对污染源进行消毒处理，并通过反复试验来验证污染被清除。

3 结果

3.1 发现污染

2017年5月，在一次常规监测中，我实验室按照正常的操作规程检测禽双拭子样品（检测H7N9），同时设立了阴性对照和阳性对照（均为试剂盒配备），扩增结束分析时发现所有的样品及阴性对照均为阳性，提示操作过程中某一环节出现了污染。

3.2 追踪污染源

出现污染后，首先考虑可能为试剂污染，使用新开封的试剂盒重新检测，结果仍显示所有的样品及阴性对照均为阳性。将样品送至省疫控中心实验室进行检测，结果显示，在试验成立的前提下，所有样品为阴性，说明试剂及样品均未被污染。……