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艾滋病、非典型性肺炎、人禽流感、病毒性肝炎等病毒性传染性疾病(Viral Infectious Disease)具有传染性强，容易引起大规模暴发流行等特点，严重威胁公众健康。当前病毒主要快速检测方法包括基于抗原抗体反应的免疫学检测方法和基于病毒核酸的分子生物学检测方法。实时荧光定量PCR是在传统PCR技术基础上发展起来的新技术，具有实时监测核酸拷贝数量、灵敏度高、检测速度快、不容易污染等优点，被广泛应用于病毒性病原体的快速检测。本文就近年来实时荧光定量PCR在各种病毒的快速检测，尤其是在狂犬病病毒及狂犬病病毒属检测中的应用和发展前景作详细介绍。

1 实时荧光定量PCR

实时荧光定量PCR(Real-Time Polymerase Chain Reaction，qPCR)是能够定量监测目的基因扩增数量的PCR新技术。原理是在PCR体系中加入荧光染料或荧光分子标记的寡核苷酸链，与PCR扩增产物结合时荧光分子在紫外线的激发下发出荧光，通过荧光信号探测器直接检测反应体系中荧光信号的变化，来监测目的基因的拷贝数量，并据此推断目的基因的初始量。Navarro等[1]将荧光标记的方法分为两类：1)双链DNA结合染料，如SYBRGreen I和Eva Green等；2)应用荧光标记的寡核苷酸链，包括3种类型：①荧光探针(Probe)，包括：水解探针(Hydrolysis probes)和杂交探针(Hybridization probe)；②荧光引物探针(Primer-Probe)，如：Scorpion primer-probes、AmplifluorTMprimer-probes等；③核酸类似物(Nucleic acid analogues)，如：LNA(Locked Nucleic Acids，锁定核酸)、PNAs(Peptide nucleic acids)、ZNA(Zip nucleic acids)等。主要定量方法包括：1)绝对定量，构建基因序列标准品并进行定量，将标准品倍比稀释并检测得到每个稀释度的Ct值，Ct值是荧光达到荧光阈值的循环数，以核酸数量为横坐标，以log(Ct)为纵坐标绘制标准曲线，通过待检样品的Ct值在标准曲线上的位置得到样本所包含的核酸量；……