张 莉， 何春萍， 刘良科*， 聂 歆，李 月， 张崇华

葛根为豆科植物野葛 [Pueraria lobata（Willd.）Ohwi]或粉藤（Pueraria thomsanii Benth.）的干燥根.野葛在我国分布较广，辽宁、河北、河南、江苏、福建、湖南等地均有分布.葛根中以葛根素为代表的异黄酮类成分，是葛根的主要有效成分[1].葛根为项背强痛之要药，现代药理已发现葛根的多种药理活性，其中包括解热、降血糖、降血脂等[2].现代研究表明，葛根素对治疗心律失常、心肌梗死、心绞痛、冠心病、高血压等心脑血管疾病有很好的疗效[3，4].迟霁菲等[5]对不同产地葛根中的葛根素含量进行了研究，发现葛根素的含量随葛根产地不同而存在较大差异.张尊听等[6]的研究发现，葛根采集的季节不同，葛根素的含量也存在明显的不同.陈元生等[7]对36份药葛种质资源进行了葛根素含量测定，36份样品的葛根素含量为0.01%-3.64%.可见，采收时间和产地等因素都影响葛根素含量.葛根是药食两用植物，葛根素含量是评价葛根药材质量的重要指标.因此，高葛根素含量葛根品种的选育具有重要的实践意义.

本研究采用高效液相色谱法，对不同产地葛根的葛根素含量进行测定，为葛根优良品种的选育和产业开发提供实验依据.

1 材料与方法

1.1 试验材料

通过对中国各地葛根资源的调查了解，于2007年开始采用野外收集和引种方式，在全国范围内收集葛根种质资源50份，种植于怀化学院生物园.根据几年的栽培观察结果，从中挑选产量较高的15份种质用于本试验研究.这15份种质中，10号、13号和14号等3份种质是野葛 [P.lobata（Wild）Ohwi]，其它12份种质是粉葛（Pereira thomsonii Benth）.以上15份种质于2016年4月10日集中种植于湖南省会同县连山乡火神坡村葛根栽培基地，常规栽培管理，2016年12月下旬挖取葛根.15份葛根种质的来源地见表1.

1.2 仪器与试剂

主要仪器有LC-15C型岛津高效液相色谱仪（日本岛津），UV—2450紫外可见分光光度计（日本岛津）等.葛根素（批号：161102）对照品购置中国食品药品检定研究院.甲醇为色谱纯；水为二次蒸馏水；其他试剂均为分析纯.

1.3 研究方法

1.3.1 对照品溶液的制备

精密称取葛根素对照品5.0 mg，用30%乙醇溶解定容至50 mL容量瓶，保存于4℃，作为对照品的储备溶液，备用.

1.3.2 供试品溶液的制备[1]

测定前，各样品均在50℃烘箱中烘干置恒重，粉碎，过60目筛.准确称取样品粉末2.0 g，置于50 mL烧杯中，加入30%乙醇20 mL，密封，室温下浸泡1 h，超声30 min（温度 45 ℃，功率 100 W，频率 40 kHz），过滤，将滤液用30%乙醇定容于50 mL容量瓶中，摇匀，即得样品溶液.

1.3.3 色谱条件[1]

色谱柱：Diamonsil C18柱（250×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇 - 水（30：70）；流速：1.0 mL/mim；检测波长：250 nm；柱温：25℃；进样量：20μL.

2 结果与分析

2.1 方法学考察

2.1.1 最佳吸收波长的选择

准确量取标准溶液1 mL于10 mL容量瓶中，用30%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，在200-400 nm波长范围内扫描，250 nm处都有很明显的吸收峰，故选择最佳检测波长为250 nm.

2.1.2 线性关系考察

分别准确量取葛根素对照品储备液 0.1、2、5、8、10 mL，置于10 mL容量瓶中，用30%乙醇定容至刻度线，制得系列浓度的葛根素对照品溶液.按“1.3.3”项下的色谱条件进行测定.以峰面积为纵坐标（Y），葛根素的含量为横坐标（X），进行线性回归，得葛根素的回归方程为：Y=76612X-100145，葛根素含量在1～100μg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系.葛根素标准品色谱图如图1.

2.1.3 精密度试验

精密量取同一溶度的对照品溶液，按“1.3.3”项下的色谱条件进行连续进样测定6次，结果显示葛根素的峰面积RSD为0.10%，表明仪器精密度良好.

2.1.4 稳定性试验

精密量取同一供试品溶液在 0、2、4、6、18、24 h 进样测定，结果显示葛根素的峰面积RSD为0.86%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好.

2.1.5 重现性试验

图1 葛根素标准品色谱图

精密称取3份同一样品，按“1.3.2”项下的方法进行制备和“1.3.3”项下的色谱条件进行测定，结果测定葛根素峰面积RSD为0.29%，表明方法的重现性良好.

2.1.6 加样回收试验

准确称取同一样品3份，精密加入葛根素对照品适量，按按“1.3.2”项下的方法进行制备和“1.3.3”项下的色谱条件进行测定，结果葛根素的平均加样回收率为100.23%，RSD为2.1%.

2.2 样品含量测定

取不同产地的葛根样品，按“1.3.2”项下的方法进行制备和“1.3.3”项下的色谱条件测定葛根素含量，葛根样品色谱图如图2，结果见表1.

从表1看出，野葛的葛根素含量高于粉葛的葛根素含量；粉葛的产地不同，其葛根素含量也存在较大差异：12个样品的葛根素含量为0.12%-1.83%，来源于火山的粉葛的葛根素含量最低，为0.12%，来源于怀化的粉葛的葛根素含量最高，为1.83%，是火山粉葛葛根素含量的15.25倍.

图2 葛根样品色谱图

表1 不同产地葛根样品中葛根素含量测定结果

3 结论与讨论

文献报道了多种提取葛根素的方法，如索氏提取、加热回流提取等[8-10]，这些方法回流时间长，且温度较高，而超声法从葛根中提取葛根素具有省时、节能、提取率和产品纯度高等优点.本实验室对超声法从葛根中提取葛根素的工艺进行了优化，以30%乙醇浸泡1 h，料液比1：20的提取效果最佳.

不同种类和产地葛根的葛根素含量差异较大，其中野葛的葛根素含量高于粉葛的葛根素含量，同时不同产地粉葛的葛根素含量也存在较大差异.作为药用的葛根，其葛根素含量必须达到药典要求：野葛的葛根素含量不低于2.4%，粉葛的葛根素含量不低于0.3%[1].因此，在实际应用中应加强对葛根的质量控制，入药时要选用固定产地的葛根，最好在采购前进行相关指标测定，或只采购经测定已达标的葛根.若要做保健品开发，也应选用葛根素含量较高的葛根，这样才能起到更好的保健作用.

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：272，312-313.

[2]彭成.中药药理学[M].北京：中国中医药出版社，2012：99-102.

[3]何惟胜.葛根及其提取物治疗心脑血管疾病药理和临床研究进展[J].时珍国医国药，2001，12（5）：470－471.

[4]范礼理.葛根黄酮对犬冠脉心脏血液动力学和心肌代谢的作用[J].中华医学杂志，1995（11）：724.

[5]迟霁菲，张国刚.高效液相色谱法测定不同产地葛根中葛根素的含量[J].中南药学，2006（4）：307-309.

[6]张尊听，杨伯伦，刘谦光，等.太白山野葛根中异黄酮和葛根素含量随季节的变化 [J].天然产物研究与开发，2001（6）：33-35.

[7]陈元生，周满生，李明.药用葛优良种质资源筛选研究[J].北方园艺，2010（21）：202－206.

[8]庞明亮，虞彗赟，蒋兵，等.天葛片中葛根素的含量测定[J].新疆中医药，2016，34（2）：44-46.

[9]李定芬，秦利芬，杨玉琴，等.贵州不同产地葛根中总黄酮和葛根素的含量测定[J].微量元素与健康研究，2016，33（2）：42-43.

[10]窦德明，代维正，陈振峰，等.秦岭不同产地葛根中葛根异黄酮含量的研究[J].中草药，2002，33（7）：663－664.