孙嘉遥，陆仁飞，赵昕，黄新祥

（江苏大学医学院，江苏镇江212013）

伤寒沙门菌（Salmonella entericaserovar Typhi，S.Typhi）是沙门菌属中一种人类肠道致病菌，通常通过污染的食物由消化道进入人体。S.Typhi可侵袭进入小肠黏膜，并克服人体免疫吞噬细胞的杀伤作用，再经血液进入肝脾等全身组织，造成严重的系统性感染——伤寒热[1－2]。

细菌中存在大量的非编码RNA（non-coding RNA，ncRNA），它们活跃参与细菌各个方面的基因表达调控[3－4]。根据作用方式可将ncRNA分为顺式编码RNA和反式作用RNA。其中，反式作用RNA大多＜200 nt，又称为小RNA（sRNA）。sRNA往往在远处有多个靶基因，且常在伴侣分子Hfq的协助下与靶mRNA形成不完全碱基互补配对发挥作用[5－6]。

本实验室前期利用Solexa高通量测序技术进行了S.Typhi转录组分析，发现了一个新的长为138 nt的 sRNA，命名为SbfR（原名称为T64）[7]，其基因序列位于yegD与一假定蛋白St00898基因之间。目前已对该sRNA进行了表达特性分析和相关菌株构建[8]，但对其在S.Typhi中发挥的作用尚未深入研究。

本研究对已构建的SbfR相关菌株进行表型和基因芯片分析，以查找表达差异基因，为后续寻找SbfR的靶基因提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株和质粒 H：z66阳性S.Typhi野生株GIFU 10007（WT）为日本岐阜大学医学院微生物学教研室馈赠。质粒pBAD/Myc-HisA为 Promega公司产品。S.Typhi空载体株（WT＋pBAD/Myc-HisA）、S.Typhi SbfR缺陷株（△SbfR＋pBAD/Myc-HisA）、S.Typhi SbfR回补株（△SbfR＋pBAD/Myc-HisA-SbfR）由本实验室制备及保存[8]。HeLa细胞购自上海生科院细胞库。

1.1.2 主要材料与试剂 胰蛋白胨、酵母提取物、氨苄西林、DMEM培养基、胰蛋白酶、胎牛血清（Oxoid公司）；NaCl、NaOH、盐酸、无水乙醇、异丙醇（上海国药集团化学试剂有限公司）；Trizol试剂（Invitrogen公司）；L-阿拉伯糖、SYBR荧光定量试剂盒、反转录试剂盒、DNA酶Ⅰ快速DNA消化试剂盒（TaKaRa公司）；……