杜盼，余江南，徐希明

（江苏大学药学院，江苏镇江212013）

原位肝移植是目前唯一能有效治疗肝脏严重疾病的方法[1－2]。然而，由于器官短缺，近年来因为肝脏疾病而死亡的人数不断增加[3]；此外，世界范围内的肝脏疾病发病率也在不断上升。肝细胞移植的临床试验已取得了极大进展[4]，但作为替代肝脏移植的肝细胞移植仍然需要解决肝细胞来源问题[5]。目前，很多研究都致力于寻找一种能够稳定产生功能性肝细胞的可行方法[6－9]，其中，可能会成为肝细胞不竭来源的细胞就是人源诱导多能干细胞（human induced pluripotent stem cells，hiPSCs）。hiPSCs具有自我更新和多向分化能力[10－13]，与人源胚胎干细胞（hESCs）相比，hiPSCs涉及的伦理问题较少，且完全不受来源限制。因此，hiPSCs来源的肝细胞（hiPSC-HEPs）在药物筛选、细胞治疗以及体外疾病模型等方面的研究中具有重要意义[14]。本实验以hiPSCs为源细胞，对其进行肝细胞定向诱导分化，并筛选优化出最佳诱导分化培养基，采用最佳诱导方案对其进行培养，使其分化为肝细胞，有望为肝细胞移植提供一种可行的细胞来源，从而更好地解决肝细胞短缺的问题。

1 材料与方法

1.1 主要材料

hiPSCs（本课题组构建，来源于人脐带间充质干细胞）[15]；β-ME（美国 Amresco公司）；hESCs-HEPs（由本实验室以hESCs诱导后形成的肝细胞，hESCs细胞购自上海干细胞库）；肝细胞培养基HBM、HCM（美国 Lonza公司）；曲古柳菌素 A（trichostatin A，TSA）购自百灵威科技有限公司；人源甲胎蛋白、白蛋白ELISA试剂盒（美国Abcam公司）；KnockoutTMDMEM培养基、FBS、KnockOutTM血清替代物（Knock-OutTMserum replacement，KSR）、非必需氨基酸（nonessential amino acid，NEAA）、谷氨酰胺替代物（glutamax，GM，美国 Gibco公司）；牛血清白蛋白（BSA）、重组抑瘤素 M（oncostatin-M，OSM）、DMSO、胰蛋白酶（美国Sigma公司）；……