高俊涛 ， 冯宪敏 ， 万 朋 ， 吕士杰 ， 任 旷 ， 朱文赫 ， 骆晓峰

(1.吉林医药学院生理学教研室 ， 吉林 吉林 132013 ； 2.吉林医药学院病原生物学教研室 ， 吉林 吉林 132013 ；3.吉林医药学院微波辐射损伤防护中心 ， 吉林 吉林 132013 ； 4.吉林医药学院低压低氧与健康研究中心 ， 吉林 吉林 132013)

高温环境对机体功能产生危害[1]，特别是导致男性不孕不育症发病率逐年升高。高温导致精子发育及雄性生殖功能异常[2]，目前对高温引起的雄性生殖功能损伤尚缺乏特效的治疗方法，芩丹颗粒具有减轻高温暴露大鼠热损伤的作用[3-4]。因此，本试验分别从大鼠性行为能力和氧化应激水平等方面来研究芩丹颗粒减轻热应激大鼠生殖功能损伤作用，为高温环境对生殖系统的影响及防治措施提供思路和方法。

1 材料与方法

1.1 实验动物分组 选择清洁级Wistar大鼠100只，雄性，体重180±20 g，由吉林大学动物实验中心提供。实验动物随机分为5组，即正常对照组、模型组，芩丹颗粒大、中、小剂量组每组20只。进入热仓前，芩丹颗粒大、中、小剂量组大鼠分别灌胃给芩丹颗粒10 g/kg、20 g/kg、40 g/kg体重，正常对照组和模型组大鼠给予等体积生理盐水，连续30 d。

1.2 仪器与试剂 DKB-501S型超级恒温水浴，Hitachi 7600生化分析仪，BiopacMP150多通道生理记录仪，BA300型数码生物显微镜,酶标仪，MuseTM细胞分析仪；SOD、GSH-PX和MDA检测试剂盒，均购自南京建成生物技术研究所(批号：20150628)。芩丹颗粒为本院自制(规格10 g/袋，批号：150401)，其主要组成包括黄芩、黄芪、丹皮、栀子等，其中主要成分为黄芩苷，栀子苷和丹皮酚，生理盐水溶解，4 ℃保存。

1.3 大鼠热损伤模型制备 使用超级恒温水浴，连接有机玻璃夹层水循环舱，保持舱温42 ℃。将大鼠置于大小合适固定器中，放入热仓，1 h/d，连续14 d，正常对照组除不接受热暴露外，其他处理与模型组相同。

1.4 相关指标的检测

1.4.1 性行为能力的观察 分别于热应激7 d和14 d，参照Anders Agmo[5]方法进行，雄性大鼠的第一次扑捉时间即扑捉潜伏期，同时观察雄性大鼠在30 min内对雌性大鼠的扑捉次数。

1.4.2 精子相对计数测定 分别于热应激7 d和14 d后，取出双侧附睾中的精子，在显微镜下计数精子数。涂片经固定、染色后在镜下观察。收集细胞使用MuseTM细胞分析仪检测精子死亡率。

1.4.3 血清SOD、GSH-PX和MDA检测 分别于热应激的7 d和14 d后，经大鼠腹主动脉取血，按照说明书进行氧化损伤指标的检测。

2 结果

2.1 芩丹颗粒对热应激雄性大鼠性行为的影响 与正常对照组比较，热应激7 d、14 d后大鼠的扑捉潜伏期显著延长、扑捉次数显著减少(P<0.05)。与模型组比较，芩丹中剂量组(P<0.05)，芩丹大剂量组(P<0.01)扑捉潜伏期显著缩短，扑捉次数显著增加(见表1)。

表1各组热应激第7、14天大鼠CIP、Ct比较

组别nCIP(s)第7天第14天Ct(次/30min)第7天第14天正常对照组1028.15±3.2328.63±2.7141.11±2.4542.34±2.17模型组1046.82±2.52*47.04±3.37**26.85±2.21*23.25±2.44**芩丹小剂量组1045.38±1.8046.18±3.0127.54±2.4824.17±3.07芩丹中剂量组1038.21±2.63#38.37±4.37#31.62±2.47#35.12±3.37#芩丹大剂量组1030.57±2.57##31.55±2.07##39.72±3.51##39.41±4.53##

注：与正常对照组比较，*：P<0.05；与模型组比较，#：P<0.05； s：秒

2.2 芩丹颗粒对热应激雄性大鼠精子的影响 与正常对照组比较，热应激7 d、14 d后大鼠的精子相对计数明显减少(P<0.05)，精子畸形率明显增加(P<0.05)。与模型组比较，芩丹中剂量组(P<0.05)，芩丹大剂量组(P<0.01)精子相对计数显著增加(P<0.05)，精子畸形率显著减少(见表2)。

表2各组热应激第7、14天大鼠精子相对计数、畸形率、精子存活率比较

精子相对计数(×106/mL)畸形率/%精子存活率/%组别n第7天第14天第7天第14天第7天第14天正常对照组10198.33±33.59194.26±30.287.03±1.467.23±1.1996.11±3.3296.25±4.18模型组10166.32±40.16*161.52±39.05*16.21±1.52*18.58±1.56*88.08±2.13*85.12±3.06*芩丹小剂量组10167.23±36.38162.55±37.5116.22±1.7217.95±1.5689.16±1.4588.05±2.75芩丹中剂量组10176.72±33.86#172.43±39.75#9.88±1.51#13.27±1.53#93.03±1.43#92.38±1.69#芩丹大剂量组10197.25±42.37#190.27±38.57#7.58±1.16#7.98±1.37#94.92±3.02##93.17±2.81##

注：与正常对照组比较，*：P<0.05；与模型组比较，#：P<0.05，##：P<0.01

2.3 芩丹颗粒对热应激雄性大鼠血清中SOD、GSH-PX活性和MDA含量的影响 与正常对照组比较，热应激7 d、14 d后大鼠的SOD、GSH-PX的活性显著降低(P<0.05)，MDA的含量显著增加(P<0.05)。与模型组比较，芩丹中剂量组(P<0.05)，芩丹大剂量组(P<0.01)SOD、GSH-PX的活性显著增加，MDA的含量显著增加(见表3)。

表3各组热应激第7、14天大鼠血清SOD、GSH-PX活性和MDA水平比较

SOD(U/mL)GSH-PX(U/L)MDA(μmol/L)组别n第7天第14天第7天第14天第7天第14天正常对照组10395.28±36.12383.04±36.31325.32±10.57328.17±11.387.26±1.127.87±1.12模型组10297.25±32.43*292.46±32.72*229.08±23.18*226.28±50.43*12.89±1.56*15.66±1.35*芩丹小剂量组10302.17±35.22305.85±36.15231.72±11.15229.72±12.5311.58±1.6115.28±1.25芩丹中剂量组10345.53±35.17#349.15±35.26#298.13±12.98#288.50±19.25#9.12±1.62#13.03±1.76#芩丹大剂量组10375.26±36.19##375.56±40.15##317.22±17.29##311.28±15.36##7.8±1.33##10.13±1.57##

注：与正常对照组比较，*：P<0.05 ；与模型组比较，#：P<0.05,##：P<0.01

A：正常对照组； B：模型组； C：芩丹小剂量组；D：芩丹中剂量组； E：芩丹大剂量组

3 讨论

我们以往的研究表明，芩丹颗粒具有减轻热损伤和微波辐射损伤的作用[4,6]。严重的高温环境，导致机体缺血缺氧并产生过量的氧化自由基，最终导致多器官功能障碍[7]。热应激对雄性生殖系统产生不良的影响，易出现过热而造成睾丸损伤。本研究表明，持续高温环境可引起精子活力下降，畸形率增加，存活率降低等。研究表明，热应激能够引起代谢改变，从而影响雄性生殖系统[2]。热应激过程中睾丸和生精细胞产生的过氧化物与精子的生理功能有关[8]。过氧化伤害引起精子膜脂质过氧化，导致雄性不育。MDA是过氧化脂质的分解产物，可反映体内自由基产生的程度。SOD、GSH-Px反映机体的抗氧化能力。本试验结果表明，高温环境暴露的过程中热应激可以随时间和强度聚集，导致精子的相对数量减少而精子的畸形率增加，模型组大鼠血清SOD、GSH-Px的活性均较正常对照组降低而MDA含量显著升高，芩丹颗粒能够提高精子的相对数量，降低精子的畸形率和死亡率，提高血清SOD、GSH-Px的活性，降低MDA含量，这些结果提示，芩丹颗粒能改善热应激对雄性大鼠生殖系统的影响，其作用机制可能与减轻生殖细胞的氧化损伤有关。

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[3] 高俊涛，万朋，王春艳，等. 芩丹颗粒对热损伤大鼠心功能的保护作用[J]. 环境与健康杂志，2016，33(1)：73-75.

[4] 高俊涛，万朋，王春艳，等.芩丹颗粒减轻高温暴露大鼠热损伤的作用及机制[J]. 山东医药，2016，56(2)：11-13.

[5] Anders Agmo. Male rat sexual behavior[J]. Brain Res Protoc 1997，1(2):203-209.

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