梁玉玲，佐藤文彦

(1.河北大学 生命科学学院，河北 保定 071002；2.河北省生物工程技术研究中心，河北 保定 071002； 3. 京都大学 大学院，日本 京都 606-8502)

黄连对羟苯基丙酮酸双加氧酶的原核表达和酶学性质

梁玉玲1，2，佐藤文彦3

(1.河北大学 生命科学学院，河北 保定 071002；2.河北省生物工程技术研究中心，河北 保定 071002； 3. 京都大学 大学院，日本 京都 606-8502)

为了研究黄连对羟苯基丙酮酸双加氧酶(CjHPPD)的功能和性质，在E.coli中异源表达其编码cDNA得到了重组的CjHPPD． 经HPLC和LC-MS检测确定重组CjHPPD具有催化对羟苯基丙酮酸形成尿黑酸的酶活性．酶学特性分析表明，CjHPPD催化尿黑酸形成的最适pH值为6.5，产物尿黑酸的积累至少在反应开始10 min内随时间呈线形增长，最适反应温度为30 ℃．以ρ-HPP为底物进行底物亲和性分析表明，CjHPPD符合Michaelis-Menten动力学曲线，Km值为43.2 μmol/L．结果表明，CjHPPD的Km值明显高于其他已报道的植物HPPD的Km值，高Km使得CjHPPD具有较强除草剂抗性．

黄连；对羟苯基丙酮酸双加氧酶；原核表达；酶学性质；Km值

对羟苯基丙酮酸双加氧酶(ρ-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase，HPPD；EC.1.13.11.27)是生物体中酪氨酸分解代谢的重要酶[1]．催化对羟苯基丙酮酸(ρ-hydrotyphenylpyruvate，HPP)与O2形成尿黑酸(homogentisate)，包括了氧化脱羧、羟基化和分子内重排等反应过程[2-3]．HPPD广泛存在于除少数革兰氏阴性细菌之外的几乎所有需氧生物中[4]，是一种含非血红素Fe2+、依靠α-酮酸的双加氧酶，铁原子以非血红素Fe2+作为酶的活性辅助因子参与了该复杂的反应过程．在植物和光合细菌中，尿黑酸还参与质体醌和生育酚生物合成途径．HPPD是质体中这两类重要异戊二烯醌类物质生物合……