乐 飞 张经宇 刘 伟 黄先明 罗文政 张 霞

甲状腺癌中NF-κB p50、NF-κB p65的表达及其与临床特征的关系

乐 飞 张经宇 刘 伟 黄先明 罗文政 张 霞

目的探讨甲状腺癌组织中NF-κB p50、NF-κB p65的表达及其与临床特征的关系。方法选取73例甲状腺癌患者作为研究对象。采用免疫组化SP法检测所有患者甲状腺癌组织的NF-κB p50、NF-κB p65表达情况，并分析其与临床特征的关系。结果①NF-κB p50表达阳性组与NF-κB p50表达阴性组之间性别、年龄、病理类型相比，差异无统计学意义(P>0.05)；NF-κB p50表达阳性组肿瘤直径、淋巴结转移显著高于NF-κB p50表达阴性组，差异有统计学意义(P<0.05)。②NF-κB p65表达阳性组与NF-κB p65表达阴性组之间性别、年龄、病理类型相比，差异无统计学意义(P>0.05)；NF-κB p65表达阳性组肿瘤直径、淋巴结转移显著高于NF-κB p65表达阴性组，差异有统计学意义(P<0.05)。③甲状腺癌组织表达NF-κB p50与NF-κB p65呈显著正相关(γs=0.653，P<0.05)。结论甲状腺癌组织表达NF-κB p50、NF-κB p65与肿瘤直径、淋巴结转移密切相关，两者可能在甲状腺癌发生发展、淋巴结转移过程中发挥协同作用。

甲状腺癌；NF-κB p50；NF-κB p65；免疫组化

甲状腺癌是目前临床头颈部、内分泌系统最常见的恶性肿瘤，传统临床确诊甲状腺癌主要采用病理形态学检查，但是该方法诊断某些不典型甲状腺癌或者微小甲状腺癌有一定的困难[1]。随着医学技术的发展，分子生物学技术逐步应用于临床，其可能为甲状腺癌的分子诊断、疗效评估提供重要依据[2]。NF-κB是一种重要的核转录因子，目前研究证实NF-κB失控与恶性肿瘤、炎症、病毒感染、感染性休克等多种类型疾病有关，NF-κB家族成员在人体内有5个亚单位，其中以p50、p65最为重要[3]。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月至2017年3月江西省肿瘤医院收治的73例甲状腺癌患者作为研究对象，患者均经术后病理组织学检查确诊，且既往无甲状腺手术史。73例甲状腺癌患者中男性20例、女性53例；年龄18～76岁，平均(44.8±12.7)岁；病理类型：乳头状癌42例、滤泡癌14例、髓样癌17例；肿瘤直径0.4～3.5 cm，平均(1.7±1.5)cm；淋巴结转移37例、无转移36例。

1.2 方法

1.2.1 NF-κB p50以及NF-κB p65表达的免疫组化检测 组织切片60 ℃烘烤30 min → 二甲苯(Ⅰ)脱蜡15 min →二甲苯(Ⅱ)脱蜡15 min → 无水乙醇(Ⅱ)5 min → 无水乙醇(Ⅰ)5 min → 95%乙醇5 min → 85%乙醇5 min → 75%乙醇5 min → 磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次，每次5 min → 在电热手提式压力蒸汽灭菌器中用柠檬酸抗原修复液进行抗原修复，当有蒸汽冒出2 min后，取出冷却 → PBS洗涤3次，每次5 min → 去除多余液体，置于湿盒，滴加3%过氧化氢去离子水，孵育10 min → PBS洗涤3次，每次5 min → 去除多余液体，置于湿盒，滴加羊血清工作夜，孵育15 min → 滴加50 μl一抗稀释液，稀释剂为PBS，稀释比例为1∶100，4 ℃冰箱过夜 → 恢复室温1 h，PBS洗涤3次，每次5 min → 置于湿盒，滴加生物素化二抗工作液，孵育15 min → PBS洗涤3次，每次5 min → 置于湿盒，滴加辣根过氧化物酶(HRP)标记链霉素液，孵育15 min → PBS洗涤3次，每次5 min → 置于湿盒，滴加二氨基联苯胺(DAB)显色剂50 μl，当细胞质呈棕黄色时将切片浸入自来水中终止显色，流水冲洗5 min → 苏木素复染1 min，流水冲洗5 min → 1%盐酸乙醇分化数1～2 s ， 流水洗涤20 min→ 75%乙醇脱水3 min → 95%乙醇脱水3 min → 无水乙醇(Ⅰ)脱水3 min → 无水乙醇(Ⅱ)脱水3 min → 二甲苯(Ⅰ)透明10 min → 二甲苯(Ⅱ)透明10 min → 中性树胶封片 → 镜下观察结果。

1.2.2 结果判断及研究对象分组 每例标本选10个高倍视野，每次观察100个细胞，阳性细胞<5%为0分，5%～25%为1分，25%～50%为2分，>50%为3分；染色程度：细胞质或细胞核基本不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。将上述两项评分结果相乘，0～1分为阴性，2～3分为弱阳性，4～6分为阳性，>6分为强阳性[4]。根据NF-κB p50检测结果将甲状腺癌患者分为2组，NF-κB p50评分0～1分为NF-κB p50表达阴性组，2～9分为NF-κB p50表达阳性组。NF-κB p65表达阴性组、NF-κB p65表达阳性组的判断及分组方法与NF-κB p50一致。

1.3 统计学分析

采用SPSS 19.0统计软件，组间性别、病理类型、淋巴结转移比较，采用χ2检验；组间年龄、肿瘤直径比较，采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NF-κB p50表达阳性组与NF-κB p50表达阴性组临床特征的比较

NF-κB p50表达阳性组与NF-κB p50表达阴性组之间性别、年龄、病理类型相比，差异无统计学意义(P>0.05)；NF-κB p50表达阳性组肿瘤直径、淋巴结转移显著高于NF-κB p50表达阴性组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 NF-κB p50表达阳性组与NF-κB p50表达阴性组临床特征的比较

2.2 NF-κB p65表达阳性组与NF-κB p65表达阴性组临床特征的比较

NF-κB p65表达阳性组与NF-κB p65表达阴性组之间性别、年龄、病理类型相比，差异无统计学意义(P>0.05)；NF-κB p65 表达阳性组肿瘤直径、淋巴结转移显著高于NF-κB p65表达阴性组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3 甲状腺癌组织表达NF-κB p50与NF-κB p65的相关性分析

经分析，甲状腺癌组织表达NF-κB p50与NF-κB p65呈显著正相关性(γs=0.653，P<0.05)。

表2 NF-κB p65表达阳性组与NF-κB p65表达阴性组临床特征的比较

3 讨论

甲状腺癌是目前临床上最常见的甲状腺恶性肿瘤，约占全身恶性肿瘤的1%，但是近年来其发病率增长快速，因此在临床上亦越来越常见[5]。与其他恶性肿瘤一样，病理形态学检查是甲状腺癌确诊最主要的方法，但该方法不适用于某些不典型甲状腺癌或者微小甲状腺癌，此时分子生物学技术被寄予厚望。

NF-κB是一种存在于真核细胞中的重要的核转录因子，它通过结合启动子区的固定核苷酸序列发挥启动基因转录作用，因此其在细胞增殖与分化，肿瘤形成、侵袭、转移等过程中发挥十分重要的功能[6]。此外，NF-κB还参与细胞对自由基、紫外线照射、细胞因子、细菌或病毒抗原等刺激的反应，并且在调节机体免疫系统对感染的反应过程中发挥关键性作用[7]。目前临床亦已经形成共识，就是NF-κB失控与恶性肿瘤、炎症、病毒感染、感染性休克、等多种类型疾病有关。进一步研究认为，NF-κB家族成员在人体内有5个亚单位，分别为Rel、RelB、p50、p52、p65，其中p50是DNA结合部位，而p65则通过Rel 同源结构域的协调作用增强转录活性，并促进 p50与DNA的结合[8]，因此NF-κB p50、NF-κB p65在NF-κB家族中最为重要。

目前NF-κB p50、NF-κB p65表达检测已广泛应用于乳腺癌、肝癌、食管鳞癌、胃癌等多种恶性肿瘤，但其在甲状腺癌中表达的研究报道较少。Pyo等[9]报道，74.6%的甲状腺乳头状癌患者表达NF-κB p65，当肿瘤直径>1 cm时，NF-κB p65表达阳性率更高，且NF-κB p65表达阳性组与NF-κB p65表达阴性组之间甲状腺外扩散、淋巴结转移、BRAF(V600E)突变差异有统计学意义(P<0.05)。秦阳等[10]报道，甲状腺癌NF-κB p50、NF-κB p65表达阳性率分别为73.00%、74.00%，甲状腺非癌组织NF-κB p50、NF-κB p65阳性率显著低于癌组织。在本研究中，73例甲状腺癌患者接受NF-κB p50、NF-κB p65表达检测，结果显示甲状腺癌组织表达NF-κB p50、NF-κB p65与患者性别、年龄、病理类型无相关，而与肿瘤直径、淋巴结转移呈显著相关性。分析其原因，可能是NF-κB p50、NF-κB p65在甲状腺癌发生发展、淋巴结转移过程中发挥了协同作用所致，但是两者之间的具体作用机制有待临床进一步研究。

[1] 陈 健.精确病理诊断在甲状腺癌精准医疗中的意义〔J〕.中国肿瘤临床，2017，44(4)：181-185.

[2] 孙 思，陈 创，李 艳.甲状腺癌分子诊断技术的研究进展〔J〕.武汉大学学报(医学版)，2016，37(1)：167-172.

[3] 张硕稳，杨 微，王新乐，等.乳腺癌组织中MTDH、IκB、NF-κB P65的表达及其临床意义〔J〕.实用癌症杂志，2016，31(10)：1578-1581.

[4] 刘宏健.HMGB1和BF-κB p50、NF-κB p50在甲状腺癌中的表达及意义〔D〕.郑州大学，2013.

[5] Aytekin T,Aytekin A,Maralcan G,et al.A cyclin D1 (CCND1) gene polymorphism contributes to susceptibility to papillary thyroid cancer in the Turkish population〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev,2014,15(17):7181-7185.

[6] Cras A,Politis B,Balitrand N,et al.Bexarotene via CBP/p300 induces suppression of NF-κB-dependent cell growth and invasion in thyroid cancer〔J〕.Clin Cancer Res,2012,18(2):442-453.

[7] 龚 艺，陈 丹，陈小琴，等.NF-κB和JNK通路调节肺炎链球菌PspA蛋白诱导人类单核细胞分泌炎性细胞因子〔J〕.中国免疫学杂志，2014，30(4)：464-467.

[8] 洪良利，秦杰升，黄杰雄，等.NF-κB p65、CyclinD1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义〔J〕.海南医学，2014，26(12)：1853-1855.

[9] Pyo JS,Kang G,Kim DH,et al.Activation of nuclear factor-κB contributes to growth and aggressiveness of papillary thyroid carcinoma〔J〕.Pathol Res Pract,2013,209(4):228-232.

[10] 秦 阳，王 玲，吕晓娟，等.NF-κB p50、NF-κB p65在甲状腺癌中的表达及意义〔J〕.中国生化药物杂志，2014，35(8)：148-150，153.

ExpressionofNF-κBp50andNF-κBp65inThyroidCarcinomaandItsRelationshipwithClinicalFeatures

LEFei，ZHANGJingyu，LIUWei,etal.

JiangxiCancerHospital,Nanchang，330029

ObjectiveTo investigate the expression of NF-κB p50 and NF-κB p65 in thyroid carcinoma and its relationship with clinical features.Methods73 cases of thyroid carcinoma were selected,and the expressions of NF-κB p50 and NF-κB p65 in all thyroid cancer tissues were detected by immunohistochemical SP method,and the relationship between expressions of NF-κB p50 and NF-κB p65 and clinical characteristics were analyzed.Results①There were no significant differences in the gender,age and pathological type between NF-κB p50 positive-expression group and NF-κB p50 negative-expression group(P>0.05),the tumor diameter and lymph node metastasis of NF-κB p50 positive-expression group were significantly higher than those of NF-κB p50 negative-expression group,respectively(P<0.05).②There were no significant differences in the gender,age and pathological type between NF-κB p65 positive-expression group and NF-κB p65 negative-expression group(P>0.05),the tumor diameter and lymph node metastasis of NF-κB p65 positive-expression group were significantly higher than those of NF-κB p65 negative-expression group,respectively(P<0.05).③The expression of NF-κB p50 was positively correlated with NF-κB p65 in thyroid carcinoma tissues (γs=0.653,P<0.05).ConclusionThe expression of NF-κB p50 and NF-κB p65 in thyroid cancer tissues is closely related to tumor diameter and lymph node metastasis,and both of them may play a synergistic role in the occurrence and development of thyroid cancer,as well as lymph node metastasis.

Thyroid cancer;NF-κB p50;NF-κB p65;Immunohistochemistry

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1768～1770)

江西省卫计委科技支撑项目(编号：20165396)

330029 江西省肿瘤医院(乐 飞，黄先明，罗文政，张 霞)；330006 南昌大学第一附属医院(张经宇)；330006 江西省妇幼保健院(刘 伟)

张 霞

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.008

R736.1

A

1001-5930(2017)11-1768-03

2017-07-18

2017-08-29)

(编辑：甘艳)