高鸿蒙

摘要：本研究采用碱性蛋白酶水解莜麦蛋白，制备分子量在5000D以下的莜麦多肽。通过正交实验得出碱性蛋白酶在温度55℃，pH9，酶用量5‰，底物浓度为3%的条件下，酶解2h，其水解度（DH）可達71.96%。

关键词：莜麦；酶解；多肽

1.实验方法

将莜麦种子用粉碎机粉碎，过筛，60℃电热恒温鼓风干燥箱干燥2-4h。取干燥过的莜麦细粉50g，加100ml正己烷于50℃水浴锅中抽提6-8h，离心，沉淀，60℃干燥，得脱脂莜麦粉。取50g脱脂莜麦粉，加100ml的70%乙醇密闭抽提1h，离心，沉淀经60℃干燥脱乙醇得莜麦粗蛋白。用凯氏定氮法测定莜麦粗蛋白粉中蛋白的含量。

将准备酶解的样品100℃煮沸10min。用碱性蛋白酶水解莜麦蛋白制备莜麦多肽。酶解反应到预定时间时，立即放入100℃沸水中灭活10min。灭酶后取1ml酶解液测定酶解反应的水解度。用柠檬酸调节酶解液的pH值到 4.3-4.5，冷藏室静置20min，8000rpm离心15分钟，去除非水解蛋白，得到的上清液即为莜麦多肽液。

用SDS-PAGE法，检测分子量5000D以下的多肽，以胰岛素为分子量参照物（5700D）。

用中空纤维超滤柱分离分子量小于5000D的多肽，将多肽液在旋转蒸发仪（70℃—80℃，0.07Mpa）中浓缩，在60℃烘箱烘干得到莜麦多肽粉。

1.1 测定指标和方法

1.1.1莜麦中脂肪含量的测定：脱脂粉常压烘干法。取一定量的莜麦粉用正己烷脱脂，将脱脂粉干燥，计算差值，可算出脂肪含量。

1.1.2莜麦蛋白含量测定：凯氏定氮法和双缩脲法。

1.1.3水解度的测定：

1.1.3.1标准曲线绘制：取12 支试管分成两组，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml的标准牛血清溶液，用水补足到1ml，然后各加入4ml双缩脲试剂，充分摇匀后，在室温放置30min，于540nm处进行比色测定。取两组测定的平均值，以牛血清白蛋白的含量为横坐标，光吸收度为纵坐标绘制标准曲线，作为定量的依据。……