王 强，孙建怀，国义民

河北省衡水市第二人民医院(衡水053000)

创伤性脑出血患者脑组织IL-1β、TNF-α与NF-κB水平变化与其预后的关系分析*

王 强，孙建怀，国义民

河北省衡水市第二人民医院(衡水053000)

目的：探讨创伤性脑出血患者脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)与核转录因子(NF-κB)水平变化与其预后的关系。方法：收集脑出血患者404例，按照发病距手术取材时间分为四组，其中≤6 h(A组)、6～24 h(B组)、24～72 h(C组)、>72 h(D组)，每组101例。另取手术入路中远离血肿的脑组织101例作为对照组。通过RT-PCR和免疫组化检测各组脑组织IL-1β、TNF-α与NF-κB 表达水平，并分析IL-1β、TNF-α与NF-κB 表达水平与创伤性脑出血患者预后的关系。结果：经RT-PCR检测，A、B、C、D组与对照组比较，IL-1β、TNF-α与NF-κB mRNA表达水平均显著升高(P<0.05)；经免疫组化检测，A、B、C、D组与对照组比较，IL-1β、TNF-α与NF-κB 蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)；创伤性脑出血患者预后良好282例，预后不良122例，预后良好患者脑组织 IL-1β、TNF-α与NF-κB蛋白表达水平显著低于预后不良患者(P<0.05)，经Spearman 相关分析，IL-1β、TNF-α、NF-κB与预后均呈负相关(r=-0.701、-0.684、-0.695，P均<0.05)。结论：创伤性脑出血后不同阶段，脑组织中IL-1β、TNF-α与NF-κB表达水平均显著升高，且IL-1β、TNF-α与NF-κB表达水平与创伤性脑出血预后呈负相关。

脑出血是常见的神经系统疾病，病死率及致残率高。创伤性脑出血(Traumatic brain injury，TBI)是在外部机械力作用下对脑部造成的损伤，常见于中青年人[1]。目前临床上关于炎性因子表达以及其与疾病预后关系研究相对较少。本研究针对TBI患者血肿周围脑组织进行研究，分析白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)与核转录因子(NF-κB)在不同阶段表达水平及其与预后关系，现报告如下。

资料与方法

1 一般资料 本研究收集2012年1月至2016年12月在衡水市第二人民医院外科收治的TBI患者404例，按照发病距手术取材时间分为四组，其中≤6 h(A组)、6～24 h(B组)、24～72 h(C组)、>72 h(D组)，每组101例标本。另取手术入路中远离血肿的脑组织101例作为对照组。所有标本均为正常手术中可以丢弃的废弃脑组织。各组患者在性别、年龄等方面差异无统计学意义(P>0.05)。

2 方 法 实验组脑组织块来自皮层造瘘通道血肿周围1～1.5 cm处，对照组脑组织块来自皮层造瘘通道灰白质交界处。取下的脑组织块一部分立刻采用10%福尔马林固定，用于免疫组化检测，另一部分立刻保存于液氮罐内，然后转移至-80 ℃冰箱，用于RT-PCR检测。

免疫组化检测：按照免疫组织化学试剂盒(武汉博士德)说明书步骤操作，免疫组化染色切片在400倍镜下取5个视野，采用MPIAS-500计算机图像分析处理系统进行积分光密度分析。

RT-PCR检测：采用TRLzol法提取细胞总RNA，根据反转录试剂盒说明书操作步骤将RNA反转录为cDNA，经适当比例稀释后，进行荧光定量PCR扩增，GAPDH为内参。反应条件为:95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，55 ℃，1 min，72 ℃ 10 s，重复38个循环。每个样本设置3个重复孔，取平均值。

3 预后情况 根据术前和术后4周神经功能缺损评分量表(NDS)评分变化判断临床转归，基本治愈：NDS评分降低≥90%；显著进步：NDS评分降低46%～90%；进步：NDS评分降低18%～45%；无效：NDS评分降低≤17%；恶化：NDS评分升高≥18%。基本痊愈、显著进步和进步患者视为病情好转，预后良好；无效和恶化患者视为病情无好转，预后不良。

结 果

1 各组炎症因子表达水平比较 经RT-PCR检测，A、B、C、D组与对照组比较，IL-1β、TNF-α与NF-κB mRNA表达水平均显著升高(P<0.05)，且C组中IL-1β、TNF-α与NF-κB mRNA表达水平最高，见表1。

表1 各组炎症因子 mRNA表达水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05

2 各组炎症因子蛋白表达水平比较 经免疫组化检测，积分光密度分析结果显示，A、B、C、D组与对照组比较，IL-1β、TNF-α与NF-κB 蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)，且C组中IL-1β、TNF-α与NF-κB 蛋白表达水平最高，见表2。

表2 各组炎症因子蛋白表达水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05

3 IL-1β、TNF-α与NF-κB蛋白表达水平与预后关系 以NDS评分变化评价患者预后，预后良好共282例，预后不良122例，预后良好患者脑组织 IL-1β、TNF-α与NF-κB蛋白表达水平分别为5.83±0.34、6.84±0.52和5.38±0.30，显著低于预后不良患者的10.27±0.51、11.35±0.48和8.56±0.39(P<0.05)。经Spearman 相关分析，结果显示IL-1β、TNF-α、NF-κB与预后均呈负相关(r=-0.701、-0.684、-0.695，P均<0.05)。

讨 论

头部外伤引起的TBI是意外伤害中残障率和病死率最高的伤害，受伤原因主要为交通事故和高空坠落。TBI早期脑血肿的占位效应可引起脑组织损伤，除此之外，出血后的局部血流改变、炎症反应、凝血酶以及自由基的级联反应等因素还会产生继发性损伤，炎性细胞因子表达是继发性损伤主要原因之一[2]。

NF-KB是一种具有多向性转录激活功能的转录因子，多种因素如炎症、细胞因子、氧自由基等均可将其激活，参与调节机体免疫反应、炎症反应等病理生理过程[3]。NF-κB在脑组织损伤后的炎症反应中起中心调节作用，可促进下游IL-1β和TNF-α等炎性因子释放，同时IL-1β和TNF-α又可作为刺激因子进一步激活NF-κB[4]。L-1β可刺激B细胞分化、CD4+T细胞增殖、中性粒细胞和单核细胞产生，还参与血管内皮损伤过程。TNF-α可直接促进中性粒细胞在血肿区域聚集，并刺激受损组织细胞和白细胞释放更多细胞因子，还可通过促进血小板活化因子等释放，造成血管舒缩功能异常、血栓和出血[5]。IL-1β和TNF-α和N F-κB共同形成的正反馈系统，使血肿灶周脑组织损害不断加重。

本研究结果显示，无论是在mRNA水平还是蛋白水平上，A、B、C、D组脑组织IL-1β和TNF-α和N F-κB表达水平较对照组均显著升高，且C组表达量最高，提示IL-1β和TNF-α和N F-κB表达在脑出血发生后72 h内逐渐升高，72 h后则呈下降趋势。以NDS评分变化作为预后判断标准，结果发现预后不良患者IL-1β和TNF-α和N F-κB表达水平均显著高于预后良好患者，说明以上炎症因子与TBI预后有一定相关性，其水平越高，预后越差，经相关性分析，结果显示IL-1β、TNF-α、NF-κB与预后均呈负相关。

综上所述，NF-κB及其下游细胞因子IL-1β和TNF-α在TBI患者脑组织中表达水平明显升高，且其表达水平越高，预后越差，提示以后可能可通过干预N F-κB表达来改善TBI患者预后。

[1] 周小龙, 张 鹏, 韦 玮. 创伤性脑出血患者的早期治疗及预后[J]. 中华神经外科疾病研究杂志, 2017, 16(4):325-328.

[2] 郝永岗, 陈 都, 王卫广,等. 外伤性脑出血术后非手术区再出血危险因素分析[J]. 神经损伤与功能重建, 2015(6):477-479.

[3] 黎建先, 蔡 林, 陈 勇,等. 亚低温对大鼠脑出血后脑组织NF-κB及ICAM-1的作用[J]. 医学临床研究, 2014(10):1949-1951.

[4] 王 辉, 王茂德. 高血压脑出血术后继发神经损害的机制和防治措施研究[J]. 陕西医学杂志, 2014,43(4):436-438.

[5] 张 阳, 谢云杰, 魏玉镇,等. 醒脑静注射液治疗急性脑出血的临床疗效及对血清炎症因子的影响[J]. 陕西中医, 2016, 37(8):997-999.

*河北省衡水市科技创新局项目(2016014082Z)

脑出血, 创伤性 白细胞介素-1β 肿瘤坏死因子 @核转录因子 预后

R743

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.12.012

(收稿：2017-05-15)