张 思，李 明，张建清，卢亚楠，翟 钰，张 峰

( 大连海洋大学 水产与生命学院,辽宁 大连 116023 )

仿刺参补体AjC3部分基因的原核表达及多克隆抗体的制备

张 思，李 明，张建清，卢亚楠，翟 钰，张 峰

( 大连海洋大学 水产与生命学院,辽宁 大连 116023 )

通过制备仿刺参补体C3(AjC3)多克隆抗体，为进一步研究仿刺参补体AjC3免疫机制奠定基础。利用PCR技术扩增AjC3部分基因片段(4556～5110 bp)，将该片段与原核表达载体pGS-21a连接。将重组表达质粒转化到Transetta(DE3)中经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍柱纯化后，作为抗原免疫小鼠制备AjC3多克隆抗体。分别用间接ELISA，Western blot检测抗体的效价和特异性。结果显示，PCR扩增得到约555 bp的目的片段，重组蛋白分子量大小约56 ku；间接ELISA检测抗体效价达1∶25600，Western blot结果显示，多克隆抗体具有良好的特异性。该试验成功的制备了补体AjC3多克隆抗体，为补体AjC3的进一步研究提供了检测工具。

仿刺参；AjC3；多克隆抗体；原核表达

仿刺参(Apostichopusjaponicus)不仅具有很高的营养价值，而且在制药及医疗保健等方面也得到了广泛应用[1]。近年来随着仿刺参养殖规模的不断壮大，养殖病害问题日趋严重。而在我国大多使用抗生素和消毒剂等方法来解决仿刺参的疾病问题，这些传统方法不仅对环境造成了污染，而且还会带来药物残留等食品安全问题[2-3]。因此有必要更加深入的探索仿刺参的免疫防御机制，从免疫学角度降低病害发生的几率。

研究表明，补体系统是由多种蛋白参与的复杂的级联反应系统，包括补体固有成分、调节因子以及补体受体等，是连接固有免疫和适应性免疫之间的重要桥梁[4-5]。……