王玉俊，王长宝,2，岳丽红

朱红栓菌原生质体制备与再生的研究

王玉俊1，王长宝1,2，岳丽红1

（1. 佳木斯大学 生命科学学院，黑龙江 佳木斯 154007；2. 佳木斯大学 环境与生物技术研究所，黑龙江 佳木斯 154007）

将2016年7月在黑龙江省凉水国家级自然保护区采集的朱红栓菌Trametes cinnabarina子实体接种于PDA固体培养基平皿中，30℃下培养7 d，截取菌丝体接种于液体培养基中用于原生质体制备与再生实验。通过单因素试验和正交试验，研究酶解温度、酶解时间、菌丝质量分数、酶配比对原生质体制备的影响。结果表明，以0.6 mol·L-1甘露醇溶液作为高渗缓冲液，复合酶组成为 1.5%溶壁酶+1.0%纤维素酶+1.0%蜗牛酶，菌丝质量分数为 20%，30℃条件下酶解3.5 h为朱红栓菌原生质体制备的最适条件，产量达1.00×107个·mL-1；以0.6 mol·L-1蔗糖溶液作为再生高渗缓冲液，原生质体再生率最高达20.6%。

朱红栓菌；单因素试验；正交试验；原生质体；制备；再生

朱红栓菌Trametes cinnabarina（Jacq.: Fr.）Fr.，又名红栓菌、朱砂菌、胭脂栓菌、朱红密孔菌等，隶属担子亚门Basidiomycotina多孔菌科Polyporaceae[1-2]。它是一种能有效降解木质素、纤维素和半纤维素的白腐真菌，可作为降解秸秆的优良菌株，减少农业焚烧秸秆产生的污染，在环境治理方面应用前景广阔。

在真菌的改良育种中，制备出高质量的原生质体对其融合及再生至关重要。高等担子菌原生质体制备的研究，始于 1972年对裂褶菌原生质体的成功分离[3]。研究表明，影响原生质体制备的因素较多，包括酶解温度、酶解时间、复合酶配比、菌丝质量分数、菌龄、高渗缓冲液、pH值等[4]，其中，复合酶的效果要好于单一酶[5-6]。……