彭桦，占静，张乙凡，孙飞，邱梦君，杨盛力

(1华中科技大学同济医学院附属梨园医院，武汉430077；2华中科技大学同济医学院附属协和医院；3贵州医科大学附属医院)

·论著·

乙型肝炎病毒X蛋白A1762T/G1764A双突变对肝癌细胞生物钟基因表达的影响

彭桦1，占静2，张乙凡3，孙飞2，邱梦君2，杨盛力2

(1华中科技大学同济医学院附属梨园医院，武汉430077；2华中科技大学同济医学院附属协和医院；3贵州医科大学附属医院)

目的研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)A1762T/G1764A双突变对肝癌细胞生物钟基因表达的影响。方法将Bel-7404细胞接种于6孔板中,待细胞生长至60%融合时按照Lipofectamine2000的说明书分别将1.0 μg的pcDNA3.1-HBx和pcDNA3.1-mHBx(A1762T/G1764A双突变)质粒转染肝癌细胞系Bel-7404细胞。采用Real-time PCR和Western blotting法检测Bel-7404细胞中CLOCK、BMAL1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Cry2、CKIε mRNA及蛋白表达。结果与转染pcDNA3.1-HBx相比，转染A1762T/G1764A双突变的pcDNA3.1-mHBx表达载体后Bel-7404细胞中Clock、Bmal1、Per2、Per3、Cry1、Cry2 mRNA和蛋白表达均降低(P均lt;0.05)。结论HBx A1762T/G1764A双突变可引起肝癌细胞生物钟基因表达紊乱。

肝肿瘤；乙型肝炎病毒X蛋白；突变；生物钟；钟控基因

乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是乙型肝炎病毒(HBV)X基因编码的一种多功能蛋白，具有生长因子样作用，可直接刺激细胞生长，并可通过影响正常细胞的细胞周期、干扰DNA修复、调节细胞增殖和凋亡、诱导细胞化疗耐药等，对肝癌的发生发展起重要的推动作用[1～3]。研究发现，HBx在肝癌细胞中常以突变体形式存在，突变后的HBx通常在生物学功能上亦发生变化。A1762T/G1764A双突变是HBx常见的突变方式之一[4]。我们前期研究结果证实，36.5%(36/101)的肝癌组织中存在A1762T/G1764A双突变，且出现双突变的患者预后较差[5]。近年来研究显示生物钟基因表达异常可能是肿瘤发生发展的原因之一[6～8]。……