吕建华，李忠民，鲁玉佳，曹坤，张金秀，王立安*

(1.河北师范大学 生命科学学院，河北 石家庄 050024；2.平泉县食用菌产业服务局，河北 平泉 067500)

朱红栓菌菌丝体的化学成分研究△

吕建华1，李忠民2，鲁玉佳1，曹坤1，张金秀1，王立安1*

(1.河北师范大学 生命科学学院，河北 石家庄 050024；2.平泉县食用菌产业服务局，河北 平泉 067500)

目的明确朱红栓菌菌丝体的主要化学成分。方法通过100 L发酵罐发酵培养朱红栓菌菌丝体，烘干粉碎后用乙酸乙酯提取，提取物采用硅胶和凝胶等柱色谱方法进行分离纯化，获得的单体化合物利用核磁共振波谱、质谱等技术进行结构鉴定。结果从朱红栓菌菌丝体的乙酸乙酯提取物共分离纯化得到11个化合物，分别是1，3-二油酰甘油酯(1)、α，α′-双棕榈酰甘油酯(2)、麦角甾醇(3)、邻苯二甲酸二丁酯(4)、啤酒甾醇(5)、阿拉伯糖醇(6)、桦褐孔菌二糖(7)、尿嘧啶(8)、金雀异黄酮(9)、琥珀酸(10)、油酸(11)。结论以上化合物均为首次从朱红栓菌菌丝体中分离得到。

朱红栓菌；菌丝体；化学成分；啤酒甾醇；金雀异黄酮

本文对朱红栓菌菌丝体的乙酸乙酯提取物的主要化学成分进行了研究，从中分离纯化共得到11个化合物，分别为1，3-二油酰甘油酯(1)、α，α′-双棕榈酰甘油酯(2)、麦角甾醇(3)、邻苯二甲酸二丁酯(4)、啤酒甾醇(5)、阿拉伯糖醇(6)、桦褐孔菌二糖(7)、尿嘧啶(8)、金雀异黄酮(9)、琥珀酸(10)、油酸(11)，以上化合物均为首次从朱红栓菌菌丝中分离得到。其中金雀异黄酮曾是一种在大豆中发现的多酚类化合物，本文对朱红栓菌进行发酵培养时，所用的培养基的成分含有大豆饼粉，但发酵结束后，培养液清澈透明，发酵产物过20目筛，菌丝体反复用水洗涤3次，菌丝体中所带的大豆饼粉含量很少。刘思妤等[8]在灵芝中也分离鉴定出金雀异黄酮，而朱红栓菌是一种与灵芝很相似的药用真菌，故本文认为金雀异黄酮是来源于朱红栓菌菌丝体。

1 仪器与材料

1.1 仪器

核磁共振仪ZMD(德国BRUKER光谱仪器公司)；电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；100 L发酵罐(上海百伦公司)；真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇、无水甲醇、三氯甲烷、丙酮均为国产分析纯，氘代试剂为进口色谱纯，正向硅胶(100～200目，200～300目)、GF254薄层色谱板均为青岛海洋化工厂生产。

1.2 材料

朱红栓菌Trametescinnabarina菌种由河北师范大学真菌实验室分离并通过ITS方法鉴定。将朱红栓菌母种接种于平板上(土豆200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、硫酸镁1 g、磷酸二氢钾3 g、琼脂20 g、水1 L)，27 ℃培养10 d，取3块直径为5 mm的菌种接种于装有250 mL培养基的三角瓶中(土豆200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、硫酸镁1 g、磷酸二氢钾3 g、水1 L)，27 ℃、120 r·min-1的恒温摇床中培养7 d。以2%的接种量接种于装有80 L培养基(大豆饼粉20 g、葡萄糖10 g、玉米粉10 g、酵母粉5 g、硫酸镁1 g、磷酸二氢钾3 g、水1 L，pH 5.5)的100 L发酵罐中，发酵培养122 h。发酵培养条件：温度为27 ℃，通气量为32 L·min-1，罐压控制在0.04 MPa。发酵产物过滤后，在4 ℃、3500 r·min-1离心收集菌丝体。

2 提取与分离

菌丝体用真空冷冻干燥机干燥后，用中草药粉碎机粉碎，得到朱红栓菌菌丝体干粉1259 g。用乙酸乙酯对菌丝干粉萃取3次，萃取液用旋转蒸发仪浓缩，得到乙酸乙酯浸膏11.2 g。

对乙酸乙酯提取物进行硅胶柱色谱，用三氯甲烷-甲醇梯度洗脱，三氯甲烷-甲醇(10∶1)析出黄色黏稠物质为化合物7(37 mg)。三氯甲烷-甲醇(1∶1)析出白色结晶为化合物6(16 mg)；三氯甲烷-甲醇(5∶1)经反复硅胶柱色谱得到化合物8(9 mg)和10(8 mg)；三氯甲烷-甲醇(15∶1)经反复硅胶与凝胶柱色谱得到化合物1(13 mg)和2(19 mg)。

收集纯三氯甲烷洗脱下来的物质，采用硅胶柱色谱进行石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，在石油醚-乙酸乙酯(5∶1)中得到化合物4(7 mg)；石油醚-乙酸乙酯(10∶1)进行反复硅胶柱色谱得到化合物11(19 mg)、3(11 mg)和5(14 mg)；石油醚-乙酸乙酯(1∶1)进行凝胶柱色谱得到化合物9(8 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：白色固体(石油醚-乙酸乙酯)。EI-MSm/z：602[M-H2O]+，576[M-C2H4O]，339[M-C13H18O2]，325[M-C19H35O2]，313，264，239，129，97，83，69，57，55。1H-NMR(CDCl3，500 MHz)δ：5.34(4H，m，H-9，10，9′，10′)，4.08～4.20(5H，m，H-a，a′，β)，2.34(4H，t，J=7.5 Hz，H-2，2′)，2.00(4H，m，H-8，11，8′，11′)，1.62(4H，m，H-3，3′)，1.25～1.30(40H，br s，H-4～7，12～17，4′～7′，12′～17′)，0.88(6H，t，J=6.8 Hz，H-18，18′)；13C-NMR(CDCl3，125 MHz)δ：174.0(C-1，1′)，130.2(C-10，10′)，129.9(C-9，9′)，68.6(C-β)，65.2(C-a，a′)，34.2(C-2，2′)，32.1(C-16，16′)，29.2～29.9(C-4～7，12～15，4′～7′，12′～15′)，27.4(C-8，8′)，27.3(C-11，11′)，25.0(C-3，3′)，22.8(C-17，17′)，14.3(C-18，18′)。以上波谱数据与文献[9]报道基本一致，故鉴定为1，3-二油酰甘油酯，为首次从朱红栓菌菌丝中分离得到。

化合物2：白色固体(石油醚-乙酸乙酯)。EI-MSm/z：550[M-H2O]+，碎片离子峰，m/z354，331，299，239，171，98，83，71，57，43表明分子具有长链结构。1H-NMR(CDCl3，500 MHz)δ：4.08～4.20(5H，m，H-a，a′，β)，2.34(4H，t，J=7.6 Hz，H-2，2′)，1.62(4H，m，H-3，3′)，1.25～1.28(48H，br s，H-4～15，4′～15′)，0.88(3H，t，J=6.9 Hz，H-16，16′)；13C-NMR(CDCl3，125 MHz)δ：174.1(C-1，1′)，68.6(C-β)，65.2(C-a，a′)，34.3(C-2)，32.1(C-14)，29.3～29.9(C-4～13)，25.0(C-3)，22.8(C-15)，14.3(C-16)。以上波谱数据与文献[10]报道基本一致，故鉴定为α，α′二棕榈酰甘油酯，为首次从朱红栓菌菌丝中分离得到。

化合物3：无色结晶(三氯甲烷)。FAB-MSm/z396[M]+。1H-NMR(CDCl3，500 MHz)δ：3.62(1H，m，H-3)，5.37(1H，br s，H-6)，5.55(1H，d，J=3.2 Hz，H-7)，0.62(3H，s，H-18)，0.93(3H，s，H-19)，1.03(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，5.16(1H，dd，J=15.2，7.8 Hz，H-22)，5.22(1H，dd，J=15.2，7.2 Hz，H-23)，0.83(3H，d，J=7.1 Hz，H-26)，0.82(3H，d，J=7.2 Hz，H-27)，0.91(3H，J=6.8 Hz，H-28)；13C-NMR(CDCl3，125 MHz)δ：39.2(C-1)，32.1(C-2)，70.5(C-3)，40.9(C-4)，139.9(C-5)，119.7(C-6)，116.4(C-7)，141.4(C-8)，46.4(C-9)，37.1(C-10)，21.2(C-11)，38.5(C-12)，42.9(C-13)，54.7(C-14)，23.1(C-15)，28.4(C-16)，55.9(C-17)，12.2(C-18)，16.4(C-19)，40.6(C-20)，21.2(C-21)，132.1(C-22)，135.7(C-23)，42.9(C-24)，33.2(C-25)，19.8(C-26)，20.1(C-27)，17.7(C-28)。以上波谱数据与文献[11]报道基本一致，故鉴定为麦角甾醇，为首次从朱红栓菌菌丝中分离得到。

化合物4：黄色油状物(三氯甲烷)。1H-NMR(CD3OD，500 MHz)δ：7.72(2H，dd，J=5.7，3.3 Hz，H-2，5)，7.61(2H，dd，J=5.7，3.3 Hz，H-3，4)，4.29(4H，t，J=6.6 Hz，H-1′，1″)，1.72(4H，m，H-2′，2″)，1.46(4H，m，H-3′，3″)，0.97(6H，m，H-4′，4″)；13C-NMR(CD3OD，125 MHz)δ：169.3(C-7，7′)，133.7(C-1，6)，132.3(C-3，4)，129.9(C-2，5)，66.7(C-1′，1″)，31.7(C-2′，2″)，20.3(C-3′，3″)，14.0(C-4′，4″)。以上波谱数据与文献[12]报道基本一致，故鉴定为邻苯二甲酸二丁酯，为首次从朱红栓菌菌丝中分离得到。

化合物5：无色针状结晶(甲醇)。EI-MSm/z：430[M]+。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：3.76(1H，m，H-3)，4.24(1H，d，J=5.6 Hz，H-6)，5.08(1H，m，H-7)，0.54(3H，s，H-18)，0.90(3H，s，H-19)，0.99(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，5.16(1H，dd，J=15.3，8.1 Hz，H-22)，5.23(1H，dd，J=15.3，7.2 Hz，H-23)，0.81(3H，d，J=6.6 Hz，H-26)，0.80(3H，d，J=6.6 Hz，H-27)，0.91(3H，J=6.8 Hz，H-28)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：36.7(C-1)，31.2(C-2)，66.0(C-3)，42.0(C-4)，74.5(C-5)，72.1(C-6)，119.5(C-7)，139.7(C-8)，43.0(C-9)，36.7(C-10)，22.6(C-11)，42.3(C-12)，48.6(C-13)，55.3(C-14)，27.7(C-15)，27.7(C-16)，54.2(C-17)，12.1(C-18)，19.5(C-19)，42.0(C-20)，21.3(C-21)，135.4(C-22)，131.4(C-23)，43.0(C-24)，32.5(C-25)，19.8(C-26)，21.0(C-27)，19.8(C-28)。以上波谱数据与文献[13]报道基本一致，故鉴定为啤酒甾醇，为首次从朱红栓菌菌丝中分离得到。

化合物6：白色针状结晶(甲醇)。FAB-MSm/z：153[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，500 MHz)δ：3.88(1H，t，J=6.2 Hz，H-2)，3.80(1H，dd，J=11.1，3.5 Hz，H-4)，3.70(1H，m，H-3)，3.60～3.64(3H，m，H-1，5)，3.53(1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-1)；13C-NMR(CD3OD，125 MHz)δ：73.0(C-3)，72.4(C-2)，72.0(C-4)，65.0(C-1)，64.8(C-5)。以上波谱数据与文献[14]报道基本一致，故鉴定为阿拉伯糖醇，为首次从朱红栓菌菌丝中分离得到。

化合物7：黄色糖浆状(甲醇)。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：4.88(1H，d，J=3.8 Hz，H-1)，3.53(1H，dd，J=10.4，3.6 Hz，H-2)，3.39(1H，m，H-3)，3.01(1H，m，H-4)，3.12(1H，m，H-5)，3.43(1H，dd，J=12.0，4.8 Hz，H-6)，4.25(1H，d，J=4.7 Hz，H-1′)，2.88(1H，t，J=8.2 Hz，H-2′)，3.09(1H，m，H-3′)，3.03(1H，m，H-4′)，3.10(1H，m，H-5′)，3.47(1H，dd，J=12.0，4.8 Hz，H-6′)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：97.0(C-1)，72.5(C-2)，73.3(C-3)，70.5(C-4)，72.1(C-5)，61.4(C-6)，92.4(C-1′)，75.0(C-2′)，76.9(C-3′)，70.5(C-4′)，76.9(C-5′)，61.4(C-6′)。以上波谱数据与文献[15]报道基本一致，故鉴定为桦褐孔菌二糖，为首次从朱红栓菌菌丝中分离得到。

化合物8：白色粉末(甲醇)。EI-MSm/z：112[M+，100]，69[M+-NHCO]，42[69-HCN]。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：10.98(2H，br s，1-NH，3-NH)，7.39(1H，d，J=7.6 Hz，H-6)，5.44(1H，d，J=7.6 Hz，H-5)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：164.3(C-4)，151.5(C-2)，142.2(C-6)，100.2(C-5)。以上波谱数据与文献[16]报道基本一致，故鉴定为尿嘧啶，为首次从朱红栓菌菌丝中分离得到。

化合物9：黄色粉末(石油醚-乙酸乙酯)。1H-NMR(CD3OD，500 MHz)δ：8.13(1H，s，H-2)，7.43(2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，H-6′)，6.89(2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，H-5′)，6.39(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.27(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)；13C-NMR(CD3OD，125 MHz)δ：180.7(C-4)，164.5(C-7)，162.5(C-5)，158.3(C-4′)，157.6(C-9)，153.5(C-2)，130.3(C-2′，6′)，123.2(C-3)，122.0(C-1′)，115.1(C-3′，5′)，105.0(C-10)，99.0(C-6)，93.6(C-8)。以上波谱数据与文献[17]报道基本一致，故鉴定为金雀异黄酮，为首次从朱红栓菌菌丝中分离得到。

化合物10：白色晶体(甲醇)。1H-NMR(CD3OD，500 MHz)δ：2.57(4H，s，H-2)；13C-NMR(CD3OD，125 MHz)δ：176.2(C-1)，29.8(C-2)。以上波谱数据与文献[18]报道基本一致，故鉴定为琥珀酸，为首次从朱红栓菌菌丝中分离得到。

化合物11：白色粉末(石油醚-乙酸乙酯)。EI-MSm/z：282[M]+。1H-NMR(CD3OD，500 MHz)δ：5.35(2H，m，H-9，10)，2.27(2H，t，J=7.4 Hz，H-2)，2.00(4H，m，H-8，11)，1.60(2H，m，H-3)，1.30～1.33(20H，br s，H-4～7，12～17)，0.90(3H，t，J=6.8 Hz，H-18).13C-NMR(CD3OD，125 MHz)δ：177.7(C-1)，130.9(C-10)，130.8(C-9)，35.0(C-2)，33.1(C-16)，30.2～30.9(C-4～7，12～15)，28.1(C-8，11)，26.1(C-3)，23.8(C-17)，14.5(C-18)。以上波谱数据与文献[19]报道基本一致，故鉴定为油酸，为首次从朱红栓菌菌丝中分离得到。

[1] 徐锦堂，兰进.中国药用真菌学[J].医学研究杂志，2002，31(1)：29.

[2] 卯晓岚.中国蕈菌[M].北京：科学出版社，2009:350-351.

[3] 戴玉成，图力古尔.中国东北野生食药用真菌图志[M].北京：科学出版社，2007:107-108.

[4] 黄年来.中国大型真菌原色图鉴[M].北京：中国农业出版社，1998:76-77.

[5] 卢卫红，朱峰，刘汉基.朱红栓菌活性物质的提取及其抗菌活性研究[J].畜牧与兽医，2012，(增刊1)：375.

[7] 刘学湘，潘扬，蒋亚平.红栓菌液态发酵后马钱子总碱中2种生物碱含量的变化[J].安徽农业科学，2012，40(22)：11225-11226.

[8] 刘思妤.灵芝化学成分的研究[D].沈阳：沈阳药科大学，2007.

[9] Su B N，Chang L C，Park E J，et al.Bioactive constituents of the seeds ofBruceajavanica[J].Planta Med，2002，68(8)：730-733.

[10] 刘云海，吴晓云，方建国，等.板蓝根化学成分研究(V)[J].中南药学，2003(5)：302-305.

[11] 吕子明，姜永涛，吴立军，等.人工蛹虫草子实体化学成分研究[J].中国中药杂志，2008，33(24)：2914-2917.

[12] 严振，田洋，马跃平，等.雷公藤根化学成分研究[J].中国现代中药，2010，12(1)：23-24.

[13] 刘玉红，徐凌川，王建平，等.茶藨子叶孔菌化学成分的研究[J].中药材，2005，28(11)：998-999.

[14] 王春兰，张集慧，郭顺星，等.粉红粘帚霉化学成分的研究[J].微生物学通报，2001，28(4)：24-27.

[15] 王宁辉.白檀化学成分及其生物活性研究[D].西安：陕西科技大学，2015.

[16] 赵余庆，李铣.红毛五加化学成分的研究[J].中国中药杂志，1991，16(7)：421-424.

[17] Agrawal P K.Carbon-13 NMR of flavonoids[J].Studies in Organic Chemistry，1989，39：283.

[18] 黄文强，施敏峰，宋晓平，等.使君子化学成分研究[J].西北农林科技大学学报(自然科学版)，2006，34(4)：79-82.

[19] 姬志强，唐娜娜，张建民，等.山风化学成分研究[J].中国药师，2015，18(12)：2067-2069.

StudyonChemicalConstituentsofMyceliumofTrametescinnabarina

LYUJianhua1，LIZhongmin2，LUYujia1，CAOKun1，ZHANGJinxiu1，WANGLi’an1*

(1.TheLifeScienceCollege，HebeiNormalUniversity，Shijiazhuang050024，China；2.PingquanEdibleFungiIndustryServiceBureau，Pingquan067500，China)

Objective：To study the chemical constituents of mycelium ofTrametescinnabarinaby liquid fermentation.MethodsLiquid fermentation was performed in 100 L fermentor.Mycelium ofT.cinnabarinawas extracted by ethyl acetate.Chemical constituents were isolated and purified using silica gel and gel column chromatographies.MS and NMR spectral analysis were used to identify their structures.ResultsEleven compounds were isolated from mycelium ofT.cinnabarinaand identified as 1，3-diolein(1)，plamitic acid-α，α′-dipropyl ester(2)，ergosterol(3)，dibutylphthalate(4)，cerevisterol(5)，arabitol(6)，inotodisaccharide(7)，uridine(8)，genistein(9)，succinic acid(10)，and oleic acid(11).ConclusionAll the compounds were isolated from mycelium ofT.cinnabarinafor the first time.

Trametescinnabarina；mycelium；chemical constituent；cerevisterol；genistein

河北省科技计划重点项目(16237301D)；河北省现代农业产业技术体系创新团队项目(HBCT2013060201)

*

王立安，教授，研究方向：食用菌菌种选育及大型真菌天然产物研究与开发；Tel：(0317)80787571，E-mail：wlian1965@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.11.008

2017-03-29)