蔺晓源+邓娜+蔡莹+刘芳

摘要：目的 观察四神丸对脾肾阳虚型泄泻模型大鼠胃窦组织Ghrelin-CaM-MLCK信号通路的影响，探讨其作用机制。方法 采用灌服腺嘌呤和番泻叶水煎剂制作脾肾阳虚型泄泻大鼠模型。将72只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和四神丸高、中、低剂量组，每组12只。各给药组给予相应药物灌胃，连续14 d，免疫组化和Western blot分别检测胃窦组织脑肠肽胃促生长素（Ghrelin）及其受体（GHSR）、钙调素（CaM）、肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的蛋白表达。结果 模型组大鼠胃窦组织Ghrelin、GHSR、CaM和MLCK蛋白表达均较正常组明显升高（P<0.01）；各给药组上述指标蛋白表达均明显低于模型组（P<0.05，P<0.01），且以四神丸高剂量组最为明显。结论 四神丸对脾肾阳虚泄泻模型大鼠的作用可能与调节Ghrelin-CaM-MLCK信号通路指标的蛋白表达有关。

关键词：四神丸；泄泻；胃促生长素；胃促生长素受体；钙调素；肌球蛋白轻链激酶；大鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.12.009

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）12-0034-04

Effects of Sishen Pills on Ghrelin-CaM-MLCK Signaling Pathway in Sinuses Ventriculi of Rats with Diarrhea of Yang Deficieney of Spleen and Kidney LIN Xiao-yuan1， DENG Na2， CAI Ying2， LIU Fang1 （1. First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410007， China； 2. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410208， China）

Abstract： Objective To explore the effects of Sishen Pills on Ghrelin-CaM-MLCK signaling pathway with sinuses ventriculi in diarrhea rats of yang deficieney of spleen and kidney； To discuss its mechanism of action. Methods A model rats with diarrhea model of yang deficieney of spleen and kidney was established by treated with intragastric administration of adenine and Senna water decoction to replicate. 72 SD rats were randomly divided into normal group， model group， positive medicine group， Sishen Pills high-， medium- and low-dose groups， with 12 rats in each group. Each medication group was given relevant medicine for gavage， for 14 days. Immunohistochemistry and Western blot were used to detect the expressions of Ghrelin and GHSR， CaM， and MLCK protein in the sinuses ventriculi. Results In the model group， Ghrelin， GHSR， CaM and MLCK protein expressions of the sinuses ventriculi significantly increased （P<0.01）. In each medication group， protein expression of the indexes was lower than the model group （P<0.05， P<0.01）. The Sishen Pills high-dose group was particularly obvious. Conclusion The effect of Sishen Pills on diarrhea model rats of yang deficieney of spleen and kidney may be associated with regulation of index protein expression in Ghrelin-CaM-MLCK signaling pathway.

Key words： Sishen Pills； diarrhea； Ghrelin； GHSR； CaM； MLCK； rats

基金項目：国家自然科学基金（81403380）；湖南省教育厅科研项目（15B178、17C1636）

通讯作者：刘芳，E-mail：2289797960@qq.com

泄泻可见于肠易激综合征等多种消化道疾病导致的腹泻，其发病率和复发率高，治愈难度大，严重影响人们的身心健康。四神丸临床治疗脾肾阳虚型泄泻疗效显著[1-2]，但其作用机制目前尚未明了。随着生物-心理-社会医学模式的提出，以及神经胃肠病学研究的发展，脑肠轴调控下的胃肠运动变化与泄泻的发病机制相关[3-4]。本研究观察四神丸对脾肾阳虚泄泻模型大鼠胃窦组织脑肠肽胃促生长素（Ghrelin）及其受体（GHSR）、钙调素（CaM）、肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的影响，为揭示四神丸治疗脾肾阳虚泄泻的作用靶点提供实验依据。endprint

1 材料与方法

1.1 动物

雄性SPF级SD大鼠72只，6～7周龄，体质量（200±20）g，湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物许可证号SCXK（湘）2013-0004。……