刘艳玲，向凤宁

(1.莱芜职业技术学院信息工程系，山东 莱芜 271100；2.山东大学生命科学院植物细胞工程与种质创新教育部重点实验室，山东 济南 250100)

麻花艽β-amyrin合成酶基因GsAS2的载体构建及遗传转化

刘艳玲1，向凤宁2

(1.莱芜职业技术学院信息工程系，山东 莱芜 271100；2.山东大学生命科学院植物细胞工程与种质创新教育部重点实验室，山东 济南 250100)

【目的】本文拟进行麻花艽β-amyrin合成酶基因GsAS2的载体构建及遗传转化。【方法】 首先利用gateway方法进行GsAS2的RNAi载体(pK7GWIWG-GsAS2)和过表达载体(pK7WG2D-GsAS2)的构建，并利用基因枪转化麻花艽胚性愈伤组织，经卡那霉素(Kan)筛选后，进一步用35S启动子引物进行抗性植株总DNA的PCR检测。【结果】获得GsAS2的RNAi阳性植株5株，过表达植株8株，转化频率分别为2.94 %和4.00 %。对转基因植株进行GsAS2的半定量RT-PCR分析和齐墩果酸的HPLC测定表明：GsAS2的表达在RNAi系中受到较大抑制，其齐墩果酸含量均低于对照(为对照的48.5 %～80.7 %)，而在过表达系中GsAS2则超量表达，且齐墩果酸含量均高于对照(为对照的1.67～2.46倍)。【结论】说明GsAS2的表达与下游产物齐墩果酸的含量关系密切。

麻花艽；β-amyrin合成酶基因；载体构建；遗传转化

【研究意义】随着基因工程技术的不断完善，应用分子克隆和遗传转化手段对植物细胞代谢网络进行修饰和改造来积累目标产物已成为研究的热点领域[1-2]。【前人研究进展】目前，通过超量表达代谢途径中的限速酶基因来提高目标产物含量已成为植物代谢工程的主要方法之一[3-5]。Yun等在颠茄中引入编码莨菪碱-6β-羟化酶基因，结果使颠茄中含量很低的东莨菪碱大量积累，并且几乎所有的莨菪碱都转化成了东莨菪碱[6]；……