徐 磊，胡小文，姚艳丽，邢淑莲，刘 洋

(中国热带农业科学院湛江实验站 广东省旱作节水农业工程技术研究中心，广东 湛江 524013)

甜高粱WRKY转录因子基因的克隆与表达分析

徐 磊，胡小文，姚艳丽，邢淑莲，刘 洋*

(中国热带农业科学院湛江实验站 广东省旱作节水农业工程技术研究中心，广东 湛江 524013)

【目的】克隆甜高粱WRKY基因，分析其序列特征和表达谱，为甜高粱抗旱育种提供基因来源。【方法】以甜高粱品种M81-E幼苗总RNA为模板，利用RT-PCR技术克隆甜高粱WRKY基因，通过生物信息学软件分析其序列特征，采用实时荧光定量PCR检测基因表达情况，获得2条WRKY基因，命名为SbWRKY1(Genebank 登录号：KY231904)和SbWRKY2(Genebank 登录号：KY231905)。【结果】SbWRKY1 cDNA序列全长1086 bp，包括1个1059 bp的开放阅读框，编码352个氨基酸。SbWRKY2 cDNA序列全长750 bp，包括1个717 bp的开放阅读框，编码238个氨基酸。2个基因编码的蛋白均具有WRKY核心序列“WRKYGQK”和“C-X4-5-C-X22-23 -H-X1-H”锌指结构模型。SbWRKY1蛋白分子式为C1628H2619N509O504S16，预测蛋白质分子量为37.89 kDa，等电点(PI)为9.78。SbWRKY2蛋白分子式为C1131H1752N326O344S21，预测蛋白质分子量为26.09 kDa，等电点(PI)为8.43。系统进化树分析表明，SbWRKY1蛋白与高粱、玉米和谷子WRKY蛋白亲缘关系较近，SbWRKY2蛋白与高粱、芒草和玉米WRKY蛋白亲缘关系较近。荧光定量PCR分析表明，随着干旱胁迫时间延长，SbWRKY1和SbWRKY2呈上调表达趋势。【结论】SbWRKY1和SbWRKY2基因可能在甜高粱应对干旱胁迫中发挥一定作用。

甜高粱；转录因子；WRKY；RT-PCR

【研究意义】转录因子(transcription factor)又称反式作用因子，它能激活或抑制相关基因表达，通过这一转录调控过程，植物可以应对各种生物及非生物胁迫[1]。根据转录因子DNA保守结构域的特点，可以将其分成若干个家族，如AP2/EREBP、MADS、bZIP和MYB等[2]。……