黄淑芳 王才益 陈玎玎 龚利洋 应志豪

(杭州动物园，杭州，310008)

181头(只)病死圈养野生动物几种脏器带菌情况的调查

黄淑芳 王才益 陈玎玎 龚利洋 应志豪

(杭州动物园，杭州，310008)

通过对2013～2015年的181头(只)发病和死亡动物进行细菌培养，在118个阳性样本中纯培养出28种病原菌(138株)，阳性率为65.19%，同时存在一种动物体内分离多种细菌的现象。其中禽类阳性率为54.79%(40/73)，分离出13种病原菌；爬行类动物阳性率为80.64%(25/31)，分离出18种病原菌；哺乳类动物阳性率为68.83%(53/77)，分离出20种病原菌。在分离出的病原菌中，除常见的肠杆科菌、革兰氏阳性球菌外还出现了巴斯德菌、假结核耶尔森氏菌、猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种、支气管炎博德特菌、枯草芽孢杆菌、解鸟氨酸乌拉尔菌等不常见的病原菌，其中假结核耶尔森氏菌在禽类的巨嘴鸟组织中分离较多，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种在爬行类红尾蚺的内脏组织中分离较多。

野生动物；病原菌；圈养；分离；鉴定

细菌是微生物中的一个大家庭成员，广泛存在于自然界环境及正常动植物体内，形成一个平衡的生态体系。一旦这一环境出现异常或机体免疫防御功能下降，可能会出现一种或几种细菌异常繁殖，释放毒性物质，引起动植物感染而致病。圈养野生动物某一个或几个细菌引起的病例时有报道[1-5]，但系统分析动物病原菌的情况较少，而实践中需要明确环境卫生因素与动物疾病的相关关系[6]，希望能给兽医工作提供一点参考。

1 材料

1.1 样本对象

2013年1月至2015年12月杭州动物园内圈养的患病野生动物，样本取其病变部位，如咽拭子、肛拭子、皮肤溃疡分泌物、鼻腔分泌物等；死亡动物在死亡后2～5 h内，按要求取其心、肝、肺、脾、肾的病变组织及肠道出血处的内容物。

1.2 试剂和设备

MH培养琼脂、中国兰琼脂、SS琼脂、双糖铁琼脂、药敏纸片采购于杭州滨和微生物试剂有限公司，API20E鉴定试剂条及配套的鉴定试剂、API20NE鉴定试剂条及配套的鉴定试剂、灭菌液状石蜡、ABI细菌鉴定软件库采购于杭州怡丹生物技术有限公司，37℃培养箱、高压灭菌锅、直径7和9的平皿、酒精灯、接种环、镊子等采购于化东医药股份有限公司器材化剂分公司。

2 实验方法

2.1 取样

在无菌条件下按要求接种大便、肠内容物、肺病料、心病料、脾病料、肝病料等接种于中国兰、SS、M-H或血培养基中，37℃培养24 h，观察菌落数量及形态。

2.2 分离

肠道样本中细菌若只有中国兰平皿生长不做进一步分析，若SS平皿中也生长并且数量较多则做进一步分析；组织器官中细菌在血平皿或者M-H平皿中生长超过10个并且菌落比较单一，对可疑菌落进行革兰氏染色镜检，并且接种双糖管，进行37℃纯培养18～24 h。

2.3 鉴定

革兰氏阴性菌纯培养的细菌通过其对双糖管的反应，制备成0.5麦氏单位的浊度，接种于API20E或者API20NE反应糟中，37℃温育24 h进行结果分析，通过阴阳性比对得出7个数字的编码，然后把编码输入ABI细菌库中，软件根据编码分析出该细菌的菌种名称，出现几种细菌都可疑时就要根据提示进行补充实验。革兰氏阳性球菌就根据革兰氏染色观察细菌形态，做氧化酶和触酶试验来判定。革兰氏阳性杆菌送到杭州市第一人民医院微生物室通过MALDI-TOF-MS基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱的方法进行鉴定。

3 结果

73只禽类患病动物中有40只分离出13种病原菌(表1)。31只(条)爬行类患病动物中，25只(条)分离出18病原菌(表2)。77只(头)哺乳类患病动物中，53只(头)分离出20种病原菌(表3)。

共分离出138株病原菌，其中肠杆科菌18种104株，占总菌株的75.36%；弧菌科2种10株，占总菌株的7.25%，非发酵菌1种4株，占总菌株的2.90%；其他革兰氏阴性菌4种6株，占总菌株4.35%；革兰氏阳性菌3种14株，占总菌株的10.14%(表4)。

从分离出细菌的部位来看，心、肝、肺、脾和肾共有84次，其中肺组织48次；肠道组织56次，其他组织15次(表5)。

表1 禽类动物病原菌情况

Tab.1 The pathogens of avians

续表1

表2 爬行类动物病原菌情况

Tab.2 The pathogens of amphibians and reptiles

表3 哺乳类动物病原菌情况

Tab.3 The pathogens of mammals

续表3

表4 病原菌情况分析

Tab.4 Analysis of the pathogens

续表4

表5 不同种类动物组织分离出的病原菌次数

Tab.5 The number of pathogenic bacteria isolated from the different kinds of animal tissue

续表5

续表5

4 讨论与分析

4.1 物种带菌率

从病原菌分离的阳性率来分析，禽类动物阳性率最低54.79%，爬行类动物阳性率最高80.64%，哺乳类动物阳性率68.83%，说明爬行类和哺乳类动物平时带菌情况比禽类动物高，在机体抵抗力下降时病原菌就可能导致出现感染。爬行类动物混合感染现象较多，感染后临床症状往往表现不突出，对其环境卫生的要求就要更高。

4.2 兽医工作思考

分离的138株病原菌中，除沙门氏菌外其他大部分是条件致病菌，其中肠杆科菌所占比达到近80%，分离的病原菌中沙雷氏菌、大肠埃希氏菌、假结核耶尔森氏菌、链球菌、葡萄球菌等与伍清林、张邓华等[7-9]在动物笼舍环境中分离的病原菌相同，提示平时在兽医的预防工作中要重视革兰氏阴性菌的消毒及防治，认识笼舍卫生及消毒的重要性。

巴斯德菌、假结核耶尔森氏菌、猪霍乱沙门氏菌、支气管炎博德特菌、鸟氨酸乌拉尔菌这几种病原菌虽然不常见，但也有过报道[10-12]，猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种在红尾蚺的心肝肺中出现7次，假结核耶尔森氏菌在巨嘴鸟的肝中出现4次，脾中出现1次，这2种菌集中出现某一区域某一种类动物体内，提示必要的预防措施。

4.3 由于条件所致所有病原菌株均未进行动物复制实验，对于致病性还有待于进一步研究。

[1] 邓家波，牛李丽，王强，等.金丝猴金黄色葡萄球菌感染的诊治一例[J].四川动物，2008，27(3)：436-436，439.

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[4] 陈永林，张成林，刘燕，等.袋鼠摩根氏菌病病原鉴定[J].中国兽药杂志，2007，41(8)：49-50.

[5] 陈武，田纯见，蔡勤辉，等.鹿科动物和斑马巴氏杆菌病的诊断[J].中国预防兽医学报，2000，22(1)：67-70.

[6] 祝俊杰.浅谈动物疫病与其生存环境之间的相关性[J].北京农业，2007(2)：16-17.

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[8] 张邓华，陈清凤，邓芸，等.重庆市动物园动物环境中常见病原菌的调查及预防保健措施[J].中国畜牧兽医，2009，36(8)：140-143.

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[10] 周紫峣，周潇潇，彭广能，等.松鼠猴感染假结核耶尔森菌的诊治[J].兽医学报，2014，34(2)：181-187.

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[12] 郭俊杰，崔征，罗燕萍.支气管败血博德特菌菌血症1例[J].中华医院感染学杂志，2007，17(8)：1034.

Investigation of Pathogenic Bacteria Isolated from Organs of 181 Captive Wildlife Individuals

Huang Shufang Wang Caiyi Chen Dingding Gong Liyang Ying Zhihao

(Hangzhou Zoo，Hangzhou，310008，China)

We cultured samples from 181 animal individuals during 2013 to 2015，and isolated 138 strains of pathogenic bacteria of 28 species from 118 samples，the positive rate of culture was 65%.We separated more than one strain of bacteria in one individual.Thirteen species of pathogenic bacteria were isolated from 40 of 73 birds，for a positive rate of 55%.Among 31 amphibians and reptiles，we isolated 18 pathogens from 25 animals for a positive rate of 81%.As for the 77 mammals，20 pathogenic bacteria were isolated from 53 samples for a positive rate of 69%.Pathogens were mostly intestinal bacteria and gram positive coccus.Also included were uncommon bacteria likePasteur，Yersiniapseudotuberculosis，Salmonellacholeraesuissubsp.diarizonae，Bordetellabronchiseptica，BacillussubtilisandRaoultellaornithinolytica.Y.pseudotuberculosiswas mostly isolated from toucan tissues，andSalmonellacholeraesuissubsp.diarizonaewas mostly isolated from Red Tail Boa.

Wildlife；Pathogen；Captive；Separation；Identification

稿件运行过程

2016-09-23

修回日期：2017-02-14

发表日期：2017-08-10

S858.9

A

2310-1490(2017)03-360-07

黄淑芳，女，39岁，高级兽医师；主要从事野生动物临床检验和动物疾病预防工作。E-mail：376000527@qq.com