李东娴+杜春华+徐怡+曹红云+汤秀梅+游燕

摘要： 目的 评价苯甲酸钠作为白及糖浆抑菌剂的抑菌效力。方法 按《中国药典》2015 年版通则1121进行实验。 结果 苯甲酸钠对白及糖浆中的细菌和真菌均具有良好的抑菌效果，其抑菌效力符合2015版中国药典对于抑菌效力的规定。结论 苯甲酸钠可以作为白及糖浆的抑菌剂添加。

关键词：抑菌效力；白及糖浆；苯甲酸钠

中图分类号：R2855 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2017）10-0077-02

白及为兰科植物白及Bletille striata（Thunb）Reichbf的干燥块茎。具有收敛止血，消肿生肌的作用。用于咯血，吐血，外伤出血，痈疡肿毒，皮肤皲裂等症[1]。白及糖浆是以白及作为主要成分制成的糖浆剂，主治功能为收敛，止血，补肺。用于长年咳嗽，肺痿咯血，肺结核，慢性气管炎，百日咳，肺气肿，久咳伤肺，咯血吐血[2]。而现在市面上该种糖浆通常为多剂量包装，且该制剂的主要成分白及并未见明显抑菌性报道，因此使用过程中易被微生物污染，为保证该产品的微生物安全性，需加入抑菌剂[3]。

2015版中国药典第四部制剂通则的0116项糖浆剂中有如下规定“三、根据需要可加入适宜的附加剂，如需加入抑菌剂，除另有规定外，在制剂确定处方时，该处方的抑菌效力应符合抑菌效力检查法（通则1121）的规定。”[4]因此对加入抑菌剂的白及糖浆进行抑菌效力的检测，是工艺研究过程中不可或缺的一环。

本研究对白及糖浆（02%苯甲酸钠），白及糖浆（03%苯甲酸钠）分别进行了抑菌效力的检测，以探讨白及糖浆抑菌剂添加的合理性。

1 实验材料

11 样品 白及糖浆（02%苯甲酸钠）和白及糖浆（03%苯甲酸钠）由云南省药物研究所制剂研究室提供，批号：20160523，包装均为100 mL/瓶。

12 稀释剂及培养基 pH70氯化钠-蛋白胨缓冲液、胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基，均由广东环凯生物科技有限公司提供，并经过培养基适应性验证。

13 菌种 金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26 003 第3代〕、大肠埃希菌〔CMCC（B）44 102 第4代〕、铜绿假单胞菌〔CMCC（B）10 104 第3代〕和白色念珠菌〔CMCC（F）10 123 第3代〕均由云南省食品药品检验所提供，黑曲霉〔CMCC（B）98 003 第3代〕，由中国药品生物制品检定所提供。

2 实验方法

参照《中国药典》2015年版第四部抑菌效力检查法（1121）进行实验，简述如下：

21 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基，30～35℃培养24 h。接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基，20～25℃培养2 d。取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌的新鲜培养物用09%无菌氯化钠溶液制成浓度为107-108 cfu/mL的菌悬液。取接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基，20～25℃培养14 d产生丰富孢子后，加入3～5 mL含005%（mL/mL）聚山梨酯80的09%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，之后用含005%（mL/mL）聚山梨酯80的09%无菌氯化钠溶液将孢子悬液稀释成浓度为107-108 cfu/mL的黑曲霉孢子悬液。取上述菌（孢子）悬液，稀释至100-1000 cfu/mL，待用。

22 方法适应性验证

221 供试液的制备 取3种白及糖浆各10 mL，加pH70氯化钠-蛋白胨缓冲液90 mL，制成1：10供试液。依次稀释为1：50，1：100稀释液。

222 试验组 取1：10，1：50，1：100供试液99 mL于灭菌试管中，加入100-1000 cfu/mL金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌01 mL，混匀后从试管中吸取1 mL注入灭菌平皿中，立刻倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，待其凝固后，倒置于恒温培养箱中30～35℃培养3 d。取1：10，1：50，1：100供试液99 mL于灭菌试管中，加入白色念珠菌、黑曲霉菌液01 mL，混匀从试管中吸取1 mL注入灭菌平皿中，立刻倾注沙氏葡萄糖琼脂培養基，待其凝固后，倒置于恒温培养箱中20～25℃培养5 d。每个菌种平行制备2个平皿，测定试验组的菌落数。

223 供试品对照组 取1：10，1：50，1：100，供试液99 mL于灭菌试管中，加pH70氯化钠-蛋白胨缓冲液01 mL，其余按试验组操作。

224 菌液对照组 取pH70氯化钠-蛋白胨缓冲液99 mL于灭菌试管中，加入制备好的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉菌液01 mL，其余按试验组操作。

23 抑菌效力实验

231 供试品接种 取2种白及糖浆各5瓶（100 mL/瓶），分别加入金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和黑曲霉107-108 cfu/mL的菌（孢子）悬液1mL，使接种后染菌量为105-106 cfu/mL，充分混匀，使供试品中的实验菌均匀分布。

232 存活菌数测定 将231中接种后的供试品，按22中合适方法进行菌落计数。完成后将供试品置20～25摄氏度避光贮存，于14 d、28 d，再次进行菌落计数。

3 结果

31 方法适应性验证结果 回收率计算公式：[（试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数）/菌液对照组平均菌落数]计算回收率，见表1。

32 存活菌落数测定结果

321 白及糖浆（02%苯甲酸钠）的菌落数测定结果 见表2。

322 白及糖浆（03%苯甲酸钠）的菌落数测定结果 见表3。endprint

4 讨论

2015版中国药典中抑菌效力检查法项下规定，用于存活菌数测定的方法，其方法适应性验证试验菌的回收率不得低于70%[4]，而2种不同抑菌剂浓度的白及糖浆方法适应性验证的结果如表1所示，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率在各稀释级中均大于70%，故1：10稀释液可以使用平皿法对菌落进行计数，而更高的稀释浓度中抑菌剂含量更低，故也可以使用平皿法进行菌落计数。

按2015版中国药典第四部制剂通则的0116项糖浆剂中的规定加入抑菌剂时“山梨酸和苯甲酸的用量不得超过03%（其钾盐、钠盐的用量分别按酸计）”[1]，即白及糖浆种的苯甲酸钠的含量不得超过03%。本实验选用了03%和02%苯甲酸钠的白及糖浆，结果显示，两个抑菌剂浓度的白及糖浆，在第14d时所有加入菌种的计数均已<10 cfu/mL，且在28 d时仍保持<10 cfu/mL的菌落计数，可见苯甲酸钠可以作为白及糖浆的抑菌剂使用。

而苯甲酸钠作为我国常用的防腐剂和抑菌剂之一，虽然一直以来都被认为是安全的，但近年来有报道苯甲酸钠也具有一定毒性。虽然报道中抑制生长[5]、损害神经系统[6]、肝脏损害[7]等的剂量都要高于药典规定的03%，但也有01%苯甲酸钠饲料饲养的小鼠体重高于对照组的报道[5]。根据本实验存活菌数测定的结果，两种含不同浓度苯甲酸钠的白及糖浆，其抑菌效力均达到药典要求，因此建议选择使用02%作为白及糖浆中苯甲酸钠的浓度。

参考文献：

[1]国家药典委员会中国药典[S].一部北京：中国医药科技出版社，2015：103

[2]中国成方制剂（卫生部颁药品标准）[S]北京：人民卫生出版社，Z11-49

[3]中国药典2015版抑菌效力检查法解讀[J].中国药师，2016，19（9）：1740-1742

[4]国家药典委员会中国药典[S].四部北京：中国医药科技出版社，2015：151-153

[5]陈玲，葛才保苯甲酸钠对小鼠体重的影响[J].首都食品与医药，2016，（2）：78-79

[6]梁川苯甲酸钠对大鼠神经系统损伤的影响[J].食品安全质量检测学报，2016，7（9）：3810-3814

[7]李锦玉，李荣欣，李京路，等苯甲酸钠多次给药对大鼠肝肾功能的影响[J].郑州大学学报（医学版）2015，50（1）：134-138endprint