王兴红

(1.中国林业科学研究院，华北林业实验中心，北京 102300；2.浙江大学 农业与生物技术学院，浙江 杭州 310058)

柑橘黑斑病菌的分子检测技术研究

王兴红1，2

(1.中国林业科学研究院，华北林业实验中心，北京 102300；2.浙江大学 农业与生物技术学院，浙江 杭州 310058)

为了快速区分柑橘黑斑病菌、亚洲柑橘叶点霉菌、首都叶点霉菌和中国柑橘叶点霉菌，在ITS1和18S区域设计了针对柑橘黑斑病菌、首都叶点霉菌和中国柑橘叶点霉菌的上游引物，以ITS4作为下游引物，并对所设计引物的特异性和退火温度进行了筛选，对引物的灵敏度进行了验证，并进行了果园疑似病斑的检测。结果表明，在退火温度为60 ℃时，引物Pc1/ITS4仅能从柑橘黑斑病菌中扩增出593 bp的特异性条带，引物Pct4/ITS4仅能从首都叶点霉菌中扩增出551 bp的条带，引物Pcc1/ITS4仅能从中国柑橘叶点霉菌中扩增出706 bp的条带，不能从柑橘常见病害病原菌中扩增出任何条带。特异性引物的灵敏度检测结果表明，引物Pc1/ITS4和Pct4/ITS4的检测灵敏度为200 pg，引物Pcc1/ITS4的检测灵敏度为20 pg。筛选的特异性引物Pc1/ITS4可以对果园疑似柑橘黑斑病病斑进行检测。因此，利用设计的特异性引物Pc1/ITS4、Pct4/ITS4和Pcc1/ITS4，结合简单的病原菌基因组DNA提取方法，可以在短时间内完成对病原菌的分子检测。

柑橘黑斑病；柑橘黑斑病菌；中国柑橘叶点霉菌；首都叶点霉菌；特异性引物

柑橘黑斑病(Citrusblack spot，CBS)，由柑橘黑斑病菌(Phyllostictacitricarpa，有性态为柑橘球座菌Guignardiacitricarpa)引起，病原菌主要侵染柑橘的果实并在果皮上形成多种类型的病斑而导致柑橘果实的商品性下降[1-5]。……