李小静 李志锋 李显平 刘保国 刘志军

056002河北邯郸，河北工程大学附属医院皮肤科

丹参酮ⅡA体外促进黑素瘤A375细胞自噬及信号通路的实验研究

李小静 李志锋 李显平 刘保国 刘志军

056002河北邯郸，河北工程大学附属医院皮肤科

目的探讨丹参酮ⅡA体外对黑素瘤细胞A375细胞自噬的影响及其信号通路研究。方法0.5、1、2、4 mg/L丹参酮ⅡA作用黑素瘤A375细胞24、48、72 h后，噻唑蓝（MTT）比色法检测A375细胞的增殖活性。1、2、4 mg/L丹参酮ⅡA作用黑素瘤A375细胞48 h，采用流式细胞仪检测细胞自噬小体的数量，Western印迹检测自噬相关蛋白Beclin⁃1和微管相关蛋白1轻链3（LC3）⁃Ⅱ蛋白及磷酸肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、p70S6激酶1（p70S6K1）蛋白的表达水平。结果MTT分析显示，0.5、1、2和4 mg/L丹参酮ⅡA分别作用黑素瘤A375细胞24、48、72 h，均能抑制A375细胞的增殖能力，且抑制作用呈剂量和时间依赖性（F=2 564.12、1 235.25，均P＜0.05）。流式细胞仪显示，1、2和4 mg/L丹参酮ⅡA作用A375细胞48 h后，细胞内自噬小体比例分别为6.91%±0.35%、13.11%±0.73%、25.51%±0.83%，均明显高于对照组（0.41%±0.02%），各组间差异有统计学意义（均P＜0.05）。Western印迹显示，1、2和4 mg/L丹参酮ⅡA作用A375细胞48 h后，细胞自噬相关蛋白Beclin⁃1和LC3⁃Ⅱ表达水平随丹参酮ⅡA浓度增加而升高，各丹参酮ⅡA组间差异有统计学意义，且高于对照组（均P＜ 0.05）。而PI3K⁃Akt⁃mTOR⁃p70S6K1信号通路中PI3K、p⁃Akt、p⁃mTOR和p⁃p70S6K1蛋白表达随丹参酮ⅡA浓度增加而下降，各丹参酮ⅡA组间差异有统计学意义，且低于对照组（均P＜0.05）。结论丹参酮ⅡA可通过抑制P13K⁃Akt⁃mTOR⁃p70S6K1信号通路，促进黑素瘤细胞发生自噬。

黑色素瘤；丹参酮；自噬；A375细胞

自噬又称Ⅱ型程序性细胞死亡，是真核细胞应对持续性内外刺激而产生的一种非损伤性应答反应。机体通过上调自噬，增强细胞自我清除受损蛋白和细胞器，降解毒性物质，并为细胞生存提供能量［1］。……