王凯悦+闫茗茗+李闯+赵杰

摘要：目的：探讨程序性死亡因子5在Graves病（GD）患者外周血单个核细胞（PBMC）的表达。方法：RT-PCR法检测50例Graves病患者外周血单个核细胞PDCD5mRNA的表达水平。结果：与正常对照比较，PDCD5mRNA在GD患者PBMC中表达升高（P<0.05），患者PDCD5mRNA表达水平与TM-Ab、TG-Ab呈显著正相关（均P<0.01），与血清T4水平及|lgTSH|呈显著负相关（均P<0.05）。结论：PDCD5mRNA在GD患者PBMC表达升高，PDCD5参与了GD淋巴细胞凋亡平衡异常。

关键词：程序性死亡因子5；PBMC；GD

中图分类号：G642.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2017）42-0044-02

Graves病（Graves disease，简称GD）是一种较为常见的自身免疫性甲状腺病（AITD）。GD又称毒性弥漫性甲状腺肿，是甲状腺功能亢进的最常见类型，约占全部甲亢的90%，本病为一多系统损害综合征，一般认为细胞免疫及体液免疫参与了其发病过程。研究发现细胞凋亡参与了自身免疫性甲状腺病的发病，甲状腺细胞凋亡的调控异常是导致GD发病的主要原因之一[1]。

程序性死亡因子5（PDCD5）是由北京大学人类疾病基因研究中心从正常培养的白血病细胞株TF-1细胞中克隆到的凋亡相关新基因。PDCD5定位于染色体19q12- q13.1，由6个外显子和5个内含子组成，cDNA全长为559bp[2]。研究表明，PDCD5可作为凋亡促进剂参与多种肿瘤、自身免疫性疾病的发生发展过程[3-5]。本研究旨在从mRNA水平研究Graves病患者PDCD5表达情况变化。

一、对象和方法

1.研究对象與分组：GD组：GD患者50例，男15例，女35例，平均年龄42.50±10.61岁。所有病人都接受了必要的临床检查，常规抽取患者空腹静脉血，实验室检测甲状腺功能指标及相关抗体参数，甲状腺摄131I率的测定和甲状腺ECT显像，均为新发病未给予任何药物治疗的初诊患者。

正常对照组（NC）50例，为本院健康查体人员，年龄36.10±10.38岁，男18例，女32例。

2.方法：（1）外周血单个核细胞PDCD5mRNA的表达：采集所有研究对象的空腹肘静脉血5ml，采用异硫氰酸胍一步法提取单个核细胞，用RT-PCR方法提取单个核细胞总mRNA，逆转录合成cDNA第一链，加PDCD5及β-actinPCR引物，在Taq酶作用下进行PCR。反应条件为：预变性：94℃ 3min，94℃ 40秒，61℃ 45秒，72℃ 50秒，循环35次，72℃延伸5分钟。8μlPCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，紫外透射仪观察，BIORAD-GD2000凝胶成像系统摄取图像并用Quantity One软件测量灰度，基因表达水平用PDCD5/β-actin灰度比。

（2）PDCD5上游引物5-CAA CAG GAA GCA AAG CAC-3；下游引物为5-GAT CTT AAC TTC TGT CCT AGAC-3。β-actin上游引物5-CCC AGG CAC CAG GGC GTG ATG GT-3；下游引物为5-GGA CTC CAT GCC CAG GAA GGA A-3。

（3）统计学处理：数据结果以均值±标准差表示，两组均数间比较采用双尾Student's t检验。对可能影响PDCD5表达水平的因素进行直线相关分析。变量TSH呈偏态分布，经过对数转换后符合正态分布，并采用对数形式进行统计分析。P<0.05差异具有显著意义，所有数据采用SPSS14.0进行统计处理。

二、结果

1.外周血单个核细胞PDCD5mRNA的表达（表1）：GD组显著高于正常对照组（P<0.05）。

2.PDCD5mRNA表达水平与临床参数的直线相关关系分析。运用统计学直线相关分析，患者PDCD5mRNA表达水平与TM-Ab、TG-Ab呈显著正相关（均P<0.01），与血清T4水平及|lgTSH|呈显著负相关（均P<0.05），与患者年龄、病史、血T3、FT3、FT4和TRAb水平无显著相关性（表2）。

三、讨论

PDCD5mRNA在Graves病患者中的表达量高于正常对照组，且与正常人比较差异有显著性（P<0.05）。PDCD5在Graves病PBMC中的过表达，提示PDCD5可能是Graves病发病的重要因素，并且这种表达量的增加在转录水平就已经开始了。GD患者外周血单个核细胞PDCD5的表达与甲状腺自身抗体TM-Ab、TG-Ab滴度呈正相关，与血清T4水平及|lgTSH|呈负相关。GD时产生的自身抗体主要包括TSH受体抗体、TM-Ab、TG-Ab。TM-Ab水平常与AITD活动有关。本研究结果显示，PDCD5表达水平与TM-Ab、TG-Ab呈显著正相关，可以认为PDCD5与GD病情进展密切相关。血清TSH及T4是反映GD的主要指标，随着GD病情的逐渐加重，血清中TSH下降及T4数值升高。本研究结果表明GD病情越加重反而PDCD5表达越低，考虑PDCD5主要在发病初期起作用发挥其促凋亡的作用。已有的研究表明，凋亡促进基因及凋亡抑制基因的表达失衡在GD的发病中有重要作用[6]，甲状腺细胞中抑制凋亡基因占优势，使甲状腺细胞凋亡减少。考虑外周血淋巴细胞可能存在类似的凋亡机制，随着GD病情的进展凋亡抑制因素逐渐占优势，所以PDCD5的表达反而减少。

综上所述，PDCD5在Graves病患者外周血单个核细胞中表达增加，参与了Graves病的发病过程，研究PDCD5的表达对于探索细胞凋亡在Graves病发病过程中的影响有重要的意义。

参考文献：

[1]白耀.甲状腺病学基础与临床[M].北京：科学技术文献出版社，2004：466-467.

[2]Chen YY，Sun RH，Han WL，et al.Nuclear translocation of TFAR19（PDCD5）：an early signal for apoptosis[J].FEBS letter，2001，509（27）：191-196.

[3]张雅菲，张连峰.原发性肝细胞癌组织中PDCD5、caspase一3蛋白的表达变化及意义[J].山东医药，2010，50（10）：36-37.

[4]陈占昆，吕厚山，王宁.PDCD5在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡中表达上调[J].中国生物化学与分子生物学报，2008，24（6）：563-568.

[5]余康康，刘顺爱，李文凡，等.促凋亡因子PDCD5与Fas在肝癌及其癌旁组织中的表达[J].世界华人消化杂志，2008，16（16）：1820-1824.

[6]史治宙，姬秋和，王瑞华，等.T3对外周血淋巴细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体表达及细胞凋亡的影响[J].中华内分泌代谢杂志，2005，21（5）：458-459.endprint