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不同特性色谱柱对肝素分离效果的比较

2017-10-19宾婕张郴陈建雯

中国科技纵横 2017年17期
关键词:肝素

宾婕+张郴+陈建雯

摘 要:肝素是一种人工合成甜味剂,甜度大约是蔗糖的250倍,在20世纪初占有很大的市场,作为糖尿病患者的代糖。有研究表明,成人摄入20-40 g会头晕,恶心,低血压与发绀和高铁血红蛋白血症。世界上大部分国家(美国、日本、中国台湾、中国香港)均禁止食品中使用肝素。在我国,肝素不在卫生标准GB2760允许使用的甜味剂名单范围内。据文献报道,常在蜜饯食品中检验出肝素的存在[1]。本文考查三种不同特性的色谱柱对食品添加剂中的肝素的分离效果,以为肝素的检测提供依据。

关键词:不同特性色谱柱;肝素;分离效果

中图分类号:TQ464 文献标识码:A 文章编号:1671-2064(2017)17-0199-01

1 材料、试剂与仪器

1.1 材料与试剂

(1)材料。食品添加剂购于市场,肝素标准品:英国APOLLO -NMR公司。(2)试剂。乙腈(色谱纯,美国TEDIA天地试剂公司),水(自制超纯水)。

1.2 仪器

安捷伦LC1200高效液相色谱仪,配荧光检测器。色谱柱为Luna(2)C18(3.0um,150×4.6mm);SunfireC18(5.0um,250×4.6mm);Zorbax SB-C18(3.5um,250×4.6mm)。振荡发生器(国华电器有限公司,BS-S),电子天平(德国赛多利斯,CP-224S)。

2 实验方法

(1)样品制备。在所选的食品添加剂中均未检出肝素,为了达到实验的目的,本研究采用加标的方式制备样品,并进行实验。(2)样品前处理。称取约1.2g(精确至0.1mg)加标样品于锥形瓶中,按规定的方法进行萃取、纯化后,取适量溶液过0.45μm滤膜,备用。(3)高效液相色谱条件。以乙腈–缓冲盐为流动相,梯度洗脱:0-20min,乙腈12-23%,流速:1mL/min,柱温:35℃,进样量10uL,检测波长:λex/λem=239/312nm。(4)样品测定。取样品(1),用三种不同特性的色谱柱按规定色谱条件(3)进行测定,结果见图1。

实验结果表明,Luna(2)C18(3.0um,150×4.6mm)较其他两根色谱柱对食品添加剂中肝素而言,具有更好的分离效能。故用Luna(2)C18(3.0um,150×4.6mm)色谱柱进行方法学考查。

3 结果与讨论

(1)线性关系考察。分别准确移取0.1、0.3、0.5、1.0、2.0mL肝素对照品溶液至50mL容量瓶中,采用甲醇-缓冲液7:3溶液定容至刻度。高效液相色谱仪分析,测定其峰面积,以浓度X(ug/mL)为横坐标,色谱峰面积Y为纵坐标,绘制标准曲线。Y=1.4813X+0.0068,r=1。結果表明肝素标品浓度在0.1004~6.0420ug/mL范围内线性关系良好。(2)精密度试验。分别精密吸取肝素对照品溶液10μL,连续进样5次,记录色谱图,计算肝素的峰面积和相对标准偏差(RSD),结果RSD为0.47%。(3)稳定性试验。精密移取同一样品溶液2(2)10μL,分别于0,2,4,8,12h进样,记录色谱图,计算肝素的峰面积和相对标准偏差(RSD),结果RSD为1.08%。(4)重复性试验。取同一样品2(1)5份,精密称定,按2(2)项下方法处理,进样测定,计算肝素的峰面积和相对标准偏差(RSD),结果RSD为0.15%。(5)加标回收率试验。对食品添加剂2(1)进行不同浓度水平的加标后,按2(2)项下方法处理,计算其加标回收率,结果肝素的平均加标回收率为98.58%(RSD=1.12%)。

4 结语

Luna(2)C18(3.0um,150×4.6 mm)色谱柱对大量普适样品能获得满意的分离效果。操作方法简单,对操作人员无特殊技术要求,检测速度快,灵敏度高,准确度高,选择性好;无需购置昂贵的检测仪器,只需配备荧光检测器的液相色谱仪即可完成检测。

参考文献

[1]杨雪娇,付登洲,黄伟,等.高效液相色谱法测定蜜饯中的对乙氧基苯脲[J].食品工业,2009,(4):68-70.

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