李 诺，孔倩莹，宾金华

（1.嘉应学院生命科学学院，广东 梅州 514015；2.华南师范大学生命科学学院，广东 广州 510631）

花生种子萌发过程中子叶内肽酶活性研究

李 诺1，孔倩莹2，宾金华2

（1.嘉应学院生命科学学院，广东 梅州 514015；2.华南师范大学生命科学学院，广东 广州 510631）

探讨花生种子在萌发过程中子叶内肽酶的活性及其同工酶数量的变化，研究金属型蛋白酶抑制剂EDTA与不同温度对内肽酶的活性的影响。采用直立玻板法萌发花生种子，运用分光光度法测定内肽酶的活力，结果发现内肽酶活力在种子萌发6 d达到最大值；运用SDS-PAGE凝胶电泳法发现在种子萌发6 d出现5条内肽酶同工酶（其中2条是金属型内肽酶）；在种子萌发8 d和10 d均出现7条内肽酶同工酶（其中4条是金属型内肽酶），这些内肽酶同工酶的最适温度约为40℃，EGTA对萌发6 d时存在的2种金属型内肽酶同工酶有明显抑制作用，但并不能完全抑制其活性。

花生；种子萌发；内肽酶；同工酶；种子活力；子叶

Abstract：The activity and isozyme of endopeptidases during peanut seeds germination were detected to research the activity of endopeptidase affected by different temperatures and inhibitors of metalloprotease EDTA.In this study，we used the standing boards to germinate peanut seeds，used spectrophotometry to determine the activity of endopeptidase during the germination of seeds. It was found that the ativity of endopeptidase reached the maximum at the sixth day. Using SDS-PAGE gel electrophoresis，we found 5 kinds of endopeptidase isoenzymes，in which there were two kind of metalloprotease of the 6 days of germination，and 7 kinds of endopeptidase isoenzymes，which there were 4 kind of metalloprotease after 8 days and 10 days of germination. The optimum temperature of these endopeptidase isozymes was about 40℃. Gelatin electrophoresis results showed that EGTA had inhibitory effect on two isozymes of metal type at 6 days of germination，but it did not completely inhibit the activity.

Key words：Arachis hypogaea L.；seed germination；endopeptidase；isoenzyme；seed vitality；cotyledon

种子萌发是种子植物发育的关键时期，其萌发过程经历着一系列复杂的生理生化变化，种子内的贮藏物质在水解酶作用下转变成供胚生长所需的物质［1］。因此在种子萌发的过程中，水解酶的活力会影响种子的萌发状况。花生种子萌发需要经过双激活过程，一方面是贮藏蛋白需要经过修饰成为可降解蛋白，另一方面是需要激活起主要降解作用的内肽酶。蛋白质降解需要水解酶的作用，蛋白水解酶的作用有多方面，主要包括参与植物生长发育过程中功能蛋白的降解和周转、清除逆境胁迫下非保护蛋白、参与降解丧失功能和不正常组装或聚积的蛋白质、加工剪接信号肽等［2-3］。……