陈兴玲 胡毓秀 王剑超 陶凤

●基础研究

莪术对功能性消化不良大鼠胃窦组织中神经递质含量的影响

陈兴玲 胡毓秀 王剑超 陶凤

目的 观察不同剂量莪术对功能性消化不良（FD）大鼠胃窦组织乙酰胆碱酯酶（Ach E）、一氧化氮（NO）、血管活性肠肽（VIP）含量的影响。方法 50只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、25%莪术组、50%莪术组、0.1%多潘立酮组，每组各10只。刺激大鼠建立FD动物模型，之后采用不同浓度莪术和多潘立酮进行灌胃给药，14d后比较各组大鼠胃窦组织中Ach E、NO、VIP水平。结果 模型对照组大鼠胃窦组织中NO和VIP水平较正常对照组升高（均P＜0.01）,而AchE减低（P＜0.01）；25%莪术组、50%莪术组大鼠胃窦组织的AchE水平均升高，而VIP和NO水平均降低（均P＜0.01）。结论 莪术可升高FD大鼠胃窦Ach E水平，降低VIP和NO水平，可能对FD有改善作用。

莪术 功能性消化不良 神经递质 胃窦

功能性消化不良（functional dyspepsia,FD）是临床上常见的一种消化系统功能性疾病。罗马Ⅲ标准将其分为2种亚型：餐后不适综合征及上腹疼痛综合征[1]。随着生活环境的改变，其发病率正逐步提高。但发病机制尚不清楚，有学者认为胃肠道动力障碍可能是FD的病理生理基础。中医观点认为“肝气郁结、脾虚失运、胃失和降”是FD的主要病机。莪术味辛苦，性温，归肝脾经，临床上可用于食积气滞较重者，有较强的行气止痛消胀作用，其所治之症与FD表现相吻合。本研究通过不同浓度莪术对FD大鼠神经递质的影响，探讨莪术治疗FD的可能价值和作用机制，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 实验材料 莪术（广西，冬季采挖，由浙江中医药大学第二附属医院提供，经浙江中医药大学鉴定符合标准）制备成25%和50%的水煎液，4℃冰箱保存备用；多潘立酮片剂（商品名：吗丁啉，规格10mg×42片，西安扬森制药有限公司生产，批号140224810）。Wistar大鼠（清洁级）50只购于北京维通利华实验动物技术有限公司[动物许可证号：SYXK（京）2012-0024]，体重190～230g，雌雄各半。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 采用简单随机分组，将50只大鼠按体重依次编号，根据编号尾数分为正常对照组、模型对照组、25%莪术组、50%莪术组、0.1%多潘立酮组，每组各10只。正常对照组常规喂养4周，其余4组进行FD大鼠建模，进行不规则喂养4周。造模方法[2]：从第2周开始，用长海绵钳夹大鼠尾巴远端1/3处，不破皮为度，激怒全笼大鼠，引发相互厮打，每次刺激30min，30min内连续不断刺激，用0.5%碘伏涂擦打斗受伤部位控制感染，每隔3h刺激1次，4次/d，连续刺激1周。当观察到大鼠进食量显著减少，毛发变暗，枯黄不顺，并有紧张、焦虑等表现，说明造模成功。之后对大鼠开始灌胃给药，模型对照组按1ml/100g给予0.9%氯化钠溶液灌胃，其余各组分别用25%莪术水煎液、50%莪术水煎液、0.1%多潘立酮混悬液给药，用量均为1ml/100g，给药时间为2周。实验结束后，大鼠腹部解剖学观察显示，所有模型组大鼠各脏器未发现器质性改变，胃肠无溃疡，肝脏色泽正常。

1.2.2 组织处理 于末次给药后12h将造模成功大鼠及正常对照组大鼠断头,留取整个胃组织，并用甲醛固定。自幽门附近处取适量的胃窦组织，用冷水冲洗干净后称重，按质量体积比加0.9%氯化钠溶液，制成10%的组织匀浆。组织匀浆离心10min（3 000r/min），取上清液置-20℃冰箱保存备检。

1.2.3 观察指标 采用ELISA双抗体夹心法测定胃窦组织中乙酰胆碱酯酶（AchE）、一氧化氮（NO）、血管活性肠肽（VIP）含量，实验试剂盒由杭州越欣生物科技有限公司提供（美国R﹠D公司分装试剂盒，批号201211），具体操作按试剂盒说明书进行。

1.3 统计学处理 采用SPSS18.0统计软件，计量资料以表示，多组计量资料比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠胃窦组织AchE、NO及VIP含量的比较见表1。

表1 各组大鼠胃窦组织AchE、NO及VIP含量的比较（nmol/g）

由表1可见，5组大鼠AchE、NO及VIP含量差异均有统计学意义（均P＜0.01），模型对照组与正常对照组，25%组、50%组、0.1%多潘立酮组与模型对组比较，差异均有统计学意义（均P＜0.01）。

3 讨论

FD是一种常见功能性疾病，普通人群发病率约为10%[3]。FD的发病机制至今尚未清楚，超过2/3的FD患者存在胃电图、胃窦/十二指肠蠕动异常,表明胃与十二指肠的蠕动障碍可能是FD的病理生理机制[4]；另外，胃肠激素紊乱和脑-肠轴功能障碍也与FD的发生、发展密切相关。除中枢神经系统外，胃肠中具有一套独特的内在神经系统，即肠道神经系统（ENS），控制着胃肠道的运动、分泌、血流及物质转运。ENS具有2种不同的功能,下调抑制性神经元与上调兴奋性神经元[5]。主要的兴奋性神经递质，包括乙酰胆碱（Ach）、P物质；抑制性神经递质主要包括NO、VIP[6]。临床上治疗FD常对症治疗，停药后症状易复发。中医治疗FD取得了较好的临床效果。研究证实，中药可能通过影响FD患者血清中神经递质而发挥其作用[7]。近期，国内学者用疏肝和胃法等中药方剂对FD患者进行治疗后证实，FD患者血清胃泌素改善，血清NO含量明显降低,其它血清胃肠激素水平变化,可促进胃肠动力，加快胃排空,其消化不良症状明显改善，安全性较好[8-9]。单味中药对FD患者胃窦中神经递质影响的报道并不多。莪术是一味应用较为广泛的中药材，具有活血化瘀作用；临床上可用于食积气滞较重者，有较强的行气止痛消胀作用，其所治之症与FD表现有诸多吻合，但其确切机制并不清楚。

本研究提示，FD大鼠胃窦组织中AchE浓度较正常明显下降，不同浓度莪术组及药物组均可明显提高FD大鼠胃窦组织中AchE含量，但AchE的升高并没有随着莪术浓度的升高而升高,这与本课题组之前的研究结果相符[10]。由此可推断，不同浓度莪术对FD大鼠胃窦组织中AchE浓度可产生不同影响，这将为今后临床的用药量提供一定的参考。Ach主要是由AchE水解而消除,在测定含量时,两者呈正相关。Ach是由在胃肠道的内源性神经支配系统中的胆碱能神经释放的，为胃肠动力兴奋性递质,具有刺激胃肠肌收缩和促进胃肠蠕动的作用。Nagahama等[11]在研究药物治疗FD时发现，药物通过胆碱能通路，抑制AchE活性，从而改善消化道产生的促胃肠动力活性。

本研究也提示，FD大鼠胃窦组织中NO、VIP含量较正常对照组明显上升，不同浓度莪术组及药物组均可明显降低FD大鼠胃窦组织中NO、VIP水平，但NO、VIP的降低并没有随莪术浓度的升高而降低。由此可推断，不同浓度莪术对FD大鼠胃窦组织中NO、VIP浓度可产生不同的影响。NO是一种抑制性神经递质，存在消化道不同部位，在抑制性神经元释放的NO中，扮演着重要的的生理作用。在肠道，NO的合成可以通过酶促通路,非酶通路或肠道细菌通路等。一氧化氮合成酶（iNOS）可以在短时间内快速合成大量的NO。多项研究证明FD患者黏膜中肥大细胞和嗜酸性粒细胞浸润，提示FD患者存在慢性炎症[12]；而炎症和免疫系统激活都可以触发iNOS的表达。有学者对FD患者进行研究，发现餐后不适综合征患者十二指肠黏膜中iNOS水平明显高于正常对照组[13]。其表达与上腹胀呈正相关,但与其他症状无显著相关；iNOS表达水平与肥大细胞脱颗粒的百分比呈正相关，提示十二指肠iNOS可能参与餐后不适综合征的发病机制。Park等[14]研究表明，iNOS基因也与FD有关。VIP是一种28-氨基酸多肽，位于胃肠道G蛋白偶联受体[15]，诱发肠道平滑肌放松，刺激水和碳酸氢盐分泌，抑制胃酸和胃蛋白酶的分泌[16]。在肠神经系统，NO和VIP是两个主要的抑制性神经递质[17]。有学者在研究乙酰水杨酸导致的猪幽门前区炎症时，发现VIP等多种神经介质与炎症的进展有关[18]。在某些病理条件下,提高胃窦平滑肌NO和VIP水平可能导致胃窦收缩减少和胃排空延迟。

由于FD患者在症状表现上各有不同，故临床上很难将其归于一个统一的病证。根据其临床表现程度的不同，中医将FD归为“胃脘痛”、“痞满”、“嘈杂”等，认为其主要发病机制为脾胃气机升降失司及瘀血内停互为因果而致。荟萃分析显示[19]，针灸可明显改善FD患者的主要症状，提高生活质量。莪术因其能行气破血消积，功能行血，与其它药物相伍，改善FD症状。

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Effect of curcuma zedoary on contents of neurotransmitters in gastric antrum of rats with functional dyspepsia

CHEN Xingling,HU Yuxiu,WANG Jianchao,et al.Department of Gastroenterology,the Second Affiliated Hospital,Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310005,China

Curcuma zed oary Functionaldyspep sia Neurotransmitters Gastric antrum

2016-09-05）

（本文编辑：马雯娜）

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.17.2016-1026

浙江省教育厅科研计划项目（Y200907811）

310005杭州，浙江中医药大学第二附属医院消化科（陈兴玲、胡毓秀），中心实验室（王剑超、陶凤）

胡毓秀，E-mail：huyuxiu70@126.com

【 Abstract】 Objective To investig ate the effect of curcuma zed oary (CZ)on contents of neurotransmitters in g astric antrum of rats with functionald ysp ep sia(FD). Methods Fifty rats were rand omly d ivid ed into five g roup s:controlg roup,mod el g roup,25%CZ g roup,50%CZ g roup and d omp erid one g roup.FD mod elwas ind uced in allg roup s excep t controlg roup,and 25%,50%water d ecoction of curcuma zed oary,0.1%d omp erid one were ad ministrated b y g avag e in 3 treatment g roup s, resp ectively.The contents of acetylcholin esterase(AchE),nitric oxid e(NO),vasoactive intestinalp ep tid e(VIP)in g astric antrum were measured. Results Comp ared to the control g roup,the contents of NO and VIP in FD g roup(mod el g roup)were increased sig nificantly(P＜0.01),and the contents of Ach E were d ecreased(P＜0.01),the contents of AchE were increased,the contents of VIP and NO in 25%and 50%CZ g roup s were d ecreased(P＜0.01).Conclusion The curcuma zed oary increases the contents of Ach E and d ecreases VIP and NO in g astric antrum of FD rat,ind icating this d rug may imp rove the symp toms of functionald ysp ep sia.