王素茹，葛会林，韩丙军，赵方方

（中国热带农业科学院分析测试中心/海南省热带果蔬农产品质量安全重点实验室，海南海口571101）

香蕉及土壤中吡唑醚菌酯和戊唑醇残留的高效液相色谱分析

王素茹，葛会林，韩丙军，赵方方

（中国热带农业科学院分析测试中心/海南省热带果蔬农产品质量安全重点实验室，海南海口571101）

采用高效液相色谱方法，分析吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉及土壤中的残留。香蕉与土壤样品用乙腈提取，用CNW/NH2固相萃取柱对香蕉及土壤中吡唑醚菌酯和戊唑醇进行净化，正己烷/丙酮作固相萃取淋洗液，并优化净化方法及其色谱条件，采用高效液相色谱仪——紫外检测器进行测定。结果表明：吡唑醚菌酯和戊唑醇的检出限分别为0.01mg/kg、0.025mg/kg。当添加水平为0.01～0.2mg/kg时，吡唑醚菌酯在香蕉全焦、焦肉及土壤中的平均回收率为90%～102%，相对标准偏差为0.9%～6.9%。当添加水平为0.025～0.5mg/kg时，戊唑醇在香蕉全焦、焦肉及土壤中的平均回收率为82%～102%，相对标准偏差为1.4%～6.6%。

吡唑醚菌酯；戊唑醇；高效液相色谱；香蕉；土壤

1 材料与方法

1.1 药剂及试剂

吡唑醚菌酯（纯度99.0%）和戊唑醇（纯度98.5%）购自Dr. Ehrenstorfer GmbH；乙腈（色谱纯）。

1.2 主要仪器设备

Waters高效液相色谱仪（2489紫外检测器）及SunfireTM C18（4.6mm×150mm,5um）。

1.3 分析方法

1.3.1 样品提取及净化提取：称样20g，加40.0mL乙腈，香蕉匀浆2min后过滤到装有7g NaCl的具塞量筒中；土壤振荡30min，加7g NaCl。振荡2min，静置20min，取上清液20.0mL至圆底烧瓶中，蒸干，加入5.0mL正己烷溶解混匀，待净化。

图1 吡唑醚菌酯标准

图2 戊唑醇标准曲线

图3 吡唑醚菌酯和戊唑醇的标准溶液

净化：用5.0mL正己烷活化CNW/ NH2固相萃取柱后，倒入待净化溶液，弃去，用5.0mL正己烷淋洗NH2小柱，重复二次，淋洗液弃去。再用5.0ml正己烷—丙酮（体积比8∶2）洗脱，重复二次，收集洗脱液。蒸干，用5.0mL甲醇定容后，待测。

1.3.2 仪器检测条件 紫外检测波长分别是220nm、278nm；流动相A为色谱纯乙腈，流动相B为优级纯纯水；柱温：35℃；进样体积：10样体；A:B为60：40；流速1.0mL/min，保持15min。在此条件下，吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留时间分别约为5.2min、9.3min。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线

值得登广告为美国近代著名趣剧之一，原名Worthy of an advertisement，曾 在纽约戏院连演二年之久，而卖座之力始终不衰，其价值可想见矣。上海杨树浦沪江大学西剧社，夙以研究西方艺术著称，成绩斐然。以海上各剧社搬演西剧本改为中文，每多失败，特就此剧照原本排演，西装西语，悉存其本来面目，演员皆系该校高材生，英语尤为流利，于剧中精彩处，尤能传神。去岁，已在该校及美公学校公演两次，颇受观众之欢迎。上星期六，乃假座北四川路爱普卢影戏院开演此剧。……

分别准确称取吡唑醚菌酯和戊唑醇标准品，用甲醇稀释，吡唑醚菌酯配制成0.01ug/ml、0.025ug/ml、0.05ug/ml、0.1ug/ml、0.5ug/ml的系列混合标准工作溶液，戊唑醇配制成0.02ug/ml、0.05ug/ml、0.1ug/ml、0.5、1ug/ml的系列混合标准工作溶液，按文中1.3.2中条件进行测定，以进样浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。吡唑醚菌酯和戊唑醇的标准曲线图分别见图1、图2。

吡唑醚菌酯和戊唑醇的标准曲线方程分别为y=38756x+121.26（R2=0.9999）和y=25193x+460.85（R2=0.9964），表明0.01～0.5ug/mL和0.02～1ug/mL进样浓度与相应峰面积之间的线性关系良好。

2.2 准确度、精密度和灵敏度

取制备好的空白对照样品，加入一定量的吡唑醚菌酯和戊唑醇标准溶液，按文中1.3.1中方法进行提取，按1.3.2中条件测定回收率及相对标准偏差。吡唑醚菌酯在香蕉与土壤中的添加水平为0.01～0.2mg/kg；戊唑醇在香蕉与土壤中的添加水平为0.025～0.5mg/kg。每个浓度重复5次。吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉全焦、香蕉焦肉及土壤上的添加回收图，见图3～图6。

吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉和土壤上的添加回收色谱图，见图1~图6。添加回收率试验结果（见表1）表明：当吡唑醚菌酯的添加水平在空白香蕉、焦肉、土壤样品中为0.01～0.2mg/kg时，其平均回收率为90%～102%，相对标准偏差为0.9%～6.9%；当戊唑醇的添加水平在空白香蕉、焦肉、土壤样品中为0.025～0.5mg/kg时，其平均回收率为82%～102%，相对标准偏差为1.4%～6.6%,符合农药残留分析方法的技术标准要求。通过添加回收试验，确定吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉和土壤样品中方法的检出限分别为0.01mg/kg、0.025mg/kg；各样品中2种化合物的最小检出量分别为0.1ng、0.2ng。所建立方法具有较好的精密度和灵敏度。

图4 吡唑醚菌酯和戊唑醇香蕉全焦空白样品（上），加标样品（下）

2.3 淋洗液

吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉焦肉中分别加标0.2mg/kg、0.5mg/kg及空白样品的净化色谱图，如图7所示。由图7可知，本研究选用CNW/NH2净化时，上样后，先用10mL正己烷淋洗去杂质，后分别用正己烷—丙酮（体积比6∶4）和正己烷—丙酮（体积比8∶2）进行洗脱样品。通过实验比较发现，2种洗脱液均可与杂质较好分离；但是选用洗脱液正己烷—丙酮（体积比6∶4）较洗脱液正己烷—丙酮（体积比8∶2）洗脱后的目标物的响应值（峰面积）明显降低，洗脱液正己烷-丙酮（体积比6∶4）正己烷—丙酮洗脱后吡唑醚菌酯和戊唑醇的回收率分别为35%、31%；而洗脱液正己烷—丙酮（体积比8∶2）洗脱净化后，吡唑醚菌酯和戊唑醇的回收率均能达到90%以上，因此选用正己烷——丙酮（体积比8：2）作为洗脱液。

表1 吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉全焦、焦肉、土壤中的添加回收率（n=5）

图5 吡唑醚菌酯和戊唑醇香蕉焦肉空白样品（A），加标样品（B）

图6 吡唑醚菌酯和戊唑醇土壤空白样品（上），加标样品（下）

图7 正己烷——丙酮（体积比6：4）洗脱液（A）和正己烷——丙酮（体积比8：2）洗脱液（B）净化香蕉焦肉中吡唑醚菌酯和戊唑醇的色谱图

2.4 色谱柱

经过选择2种不同的色谱柱进样时比较发现，当色谱柱为XTERRMS C18(4.6mm×250mm，5um)时，吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留时间分别约为6.9min、12.1min；当色谱柱为SunfireTMC18(4.6mm×150mm,5um)均能达到的添加回收时，吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留时间分别约为5.2min、9.3min。在同一液相色谱仪上，流动相组成、梯度洗脱方法相同，采用不同的色谱柱，可以导致组分的保留时间差异较大。为了节省进样时间，提高样品分析的效率，本方法确定采用SunfireTMC18（4.6mm×150mm，5um）色谱柱进行吡唑醚菌酯和戊唑醇的残留分析。

3 结论

本研究采用Waters高效液相色谱仪（2489紫外检测器），经过大量的试验数据验证与查看相关文献，对本研究进行优化对比，建立了一套较为简便的同时检测香蕉和土壤中的吡唑醚菌酯和戊唑醇残留的方法。选用CNW/NH2净化，净化杂质少、响应高,净化时通过比较发现，洗脱液选用正己烷—丙酮（8+2）回收率比正己烷—丙酮（6+4）回收率效果更好，因此确定选用正己烷—丙酮（8+2）为净化洗脱液；为提高样品分析的速率，通过选择两条长度分别是250mm和150mm的色谱柱进行进样比较，试验证明选择SunfireTMC18（4.6mm× 150mm，5um）进样吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留时间较选择色谱柱为XTERRMS C18（4.6mm×250mm，5um）进样吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留时间短，因此，选择 SunfireTMC18（4.6mm×150mm,5um）色谱柱进样是一种简便、快捷的同时检测香蕉中吡唑醚菌酯和戊唑醇残留分析仪器的方法；采用外标法，通过UPLC定性定量检测的灵敏度、精密度和回收率等均符合农药残留分析的要求。同时也为其他作物中吡唑醚菌酯和戊唑醇残留分析方法提供了依据。

[1]傅强,聂思桥,任竞,等,戊唑醇和吡唑醚菌酯在玉米植株和土壤中残留及其消解动态的检测[J].湖南农业大学学报（自然科学版）,2015,41(06)：661-665.

[2]彭埃天,李鑫,刘景梅,等.25%吡唑醚菌酯乳油对香蕉黑星病毒力测定与防治试验[J].植物保护,2008,34(02):134-137.

[3]赵方方,谢德芳,吕岱竹.香蕉及土壤中吡唑醚菌酯残留的高效液相色谱分析[J].西北农林科技大学学报（自然科学版）,2016,44(01):97-110.

[4]吴进龙,季颖,傅桂平,等.75%肟菌酯·戊唑醇WG气相色谱分析[J].农药,2009, 48(07):498-499.

[5]吴迪,聂向云,张希跃,等.土壤中吡唑醚菌酯的残留分析方法和消解动态研究[J].农药科学与管理,2012,33(07):25-28.

[6]张谦,盛翠凤,谭成侠,等.戊唑醇的液相色谱检测方法[J].浙江工业大学学报, 2008,36(02):129-132.

[7]闫晓阳,徐金丽,徐光军,等.高效液相色谱法检测吡唑醚菌酯在烟叶和土壤中的残留及消解动态[J].农药学学报,2013, 15(05):528-533.

[8]吴琼,林靖凌,张月,等.GC-MS法测定香蕉及土壤中戊唑醇残留量[J].安徽农业科学,2012,40(30):14779-14781,14813.

[9]朱珠,吕岱竹,袁宏球.气相色谱—三重四级杆串联质谱法测定香蕉中戊唑醇残留[J].热带作物学报,2013,34(12):2484-2488.

[10]刘军,张仙,沈菁,等.液相色谱—质谱法对柑橘中吡唑醚菌酯残留的检测[J].湖北农业科学,2014,53(19):4698-4700.

[11]赵方方,谢德芳,张月,等.UPLC-MS/MS法对香蕉果肉中吡唑醚菌酯残留的测定[J].湖北农业科学,2015,54(10):2477 -2479.

[12]巩丽萍,李玉杰,丁勃.泽泻特征图谱保留时间重现性的研究[J].药物分析杂志,2011,31(01):141-144.

[13]姚缓缓,段正康,曾航日,等.正相液相色谱保留时间漂移的影响因素和解决办法研究[J].应用化工,2016,45(06):1184 -1190.

[14]高琳,阎芳.影响高效液相色谱仪保留时间的因素及解决对策[J].畜牧与科学,2012,33(09):20.

[15]张玉荣,刘琦,孙志清.高效液相色谱法相对保留时间和峰高比在毒物筛选中的应用[J].法医学杂志,1995,11(02):57 -59.

[16]郝卫强,狄斌,杨永兵,等.梯度液相色谱中任意等度、线性和阶梯梯度组合下的保留时间公式[J].色谱,2010,28(06):541-546.

[17]NY/T788 2004农药残留试验准则[S].

农业部农药残留试验项目（2015F086）

TQ450.2

A

10.14025/j.cnki.jlny.2017.18.022

王素茹，本科学历，助理工程师，研究方向：农药残留分析。