翟羽晨，王万能*，项钢燎，张潇骏，刘 钦，唐晓莲，戴 亚，马扩彦，谭兰兰

(1.重庆理工大学 药学与生物工程学院，重庆 400054; 2.重庆中烟工业有限责任公司，重庆 400060; 3.四川中烟工业有限责任公司，四川 成都 610000)

BCA-TCA法快速测定烟草蛋白质的研究

翟羽晨1，王万能1*，项钢燎1，张潇骏1，刘 钦1，唐晓莲1，戴 亚2，马扩彦2，谭兰兰3

(1.重庆理工大学 药学与生物工程学院，重庆 400054; 2.重庆中烟工业有限责任公司，重庆 400060; 3.四川中烟工业有限责任公司，四川 成都 610000)

为快速准确地测定烟草中的蛋白质含量，建立并优化了BCA-TCA法，即提取烟叶蛋白质的最佳体系条件为pH值7.0的0.05 mol/L PBS缓冲液、液料比40 mL/g，使用TCA沉淀蛋白质，利用差减法去除烟叶中还原性物质对BCA方法准确性的影响，从而准确测定样品的蛋白质含量。结果表明：该方法测得的烟叶样品蛋白质含量变异系数小于5%，重复性较好；样品的加标回收率为96.39%，加标回收变异系数为0.75%<2%,准确度高；BCA-TCA法和克达尔法测定值的t检验结果为t=1.554 5

烟草； 蛋白质； BCA-TCA法； 测定

烟草是我国重要的经济作物之一，在国民经济中占有举足轻重的地位。蛋白质是烟叶的重要化合物，过多的蛋白质会增加烟叶燃烧时的苦味和烧焦羽毛味[1]，因此，快速准确地测定烟草中的蛋白质含量对及时评价烟叶品质具有重要意义。蛋白质含量测定方法有凯氏定氮法、克达尔法、Lowry法、二喹啉甲酸(BCA)法等[2-4]。国际上常采用克达尔法或改良的凯氏定氮法测定烟叶蛋白质含量，虽然测定较准确，但由于操作繁琐、检测周期长，限制了其应用和推广[5-6]；连续流动分析法已在国内烟草行业普遍使用[7]，但其耗时达10 h以上[8]，而且这些方法测得的为总氮量，受样品中非蛋白质氮的影响，无法真正准确地测得烟叶的蛋白质含量。……