方 东

(洛阳市妇女儿童医疗保健中心生殖医学研究所，河南 洛阳 471000)

精子DNA完整率对卵胞浆内单精子注射术结局的影响

方 东

(洛阳市妇女儿童医疗保健中心生殖医学研究所，河南 洛阳 471000)

目的 探讨精子DNA完整率对卵胞浆内单精子注射术(ICSI)结局的影响。方法 选取行ICSI治疗的50对不孕不育夫妻，采用DNA吖啶橙染色法(AOT)对精子DNA完整性进行分析。以精子DNA碎片指数(DFI)<15%者为低DFI组(n=31)，DFI>30%者为高DFI组(n=19)，观察精子DNA完整率对ICSI结局的影响。结果2组受精率比较差异无统计学意义(P>0.05)，高DFI组早期卵裂率、优质胚胎率及妊娠率显著高于低DFI组(P<0.05)。结论 低精子DNA完整率对ICSI的早期卵裂率、胚胎发育以及妊娠率具有不良的影响，因此在行ICSI术前首先应评估精子DNA完整性。

卵胞浆内单精子注射术； 精子； DNA完整率； 胚胎质量

精子DNA损伤受多种因素影响，药物与放化疗、生殖道炎症、睾丸部高温以及激素水平等均是其常见因素，精子DNA损伤是导致不孕不育发生的新的影响因素[1]。卵胞浆内单精子注射术(ICSI)为患者生育带来希望，其可通过人工受精提高受精率，使其顺利妊娠，但相关研究显示[2]，目前我国ICSI成功率仅为30%，且治疗费用高，术后不良妊娠结局多，从而很大程度上限制了辅助生殖技术的应用，同时临床仅通过常规精液分析，并不能对男性生育能力和不育原因做出判断[3]。因此本研究主要通过ICSI治疗的男方精子DNA完整性损伤及精子DNA片段指标的研究，观察精子DNA完整率情况对ICSI结局的影响，将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年6月至2016年6月于洛阳市妇女儿童医疗保健中心行ICSI的50对不孕不育夫妻为研究对象。纳入标准：1)具有不孕不育情况，男性病理检查结果显示少精或无精，女方经病理以及B超检查显示卵巢功能正常；2)女性年龄≤检查岁；3)签订知情同意书并积极配合者。排除标准：1)不符合上述纳入标准者；2)女方无输卵管积水或其他影响研究结果的疾病；3)不能完整完成本研究者。根据DNA吖啶橙染色法(AOT)对患者的精子进行检测，分析精子DNA的相关情况，以DNA碎片指数(DFI)<15%者为低DFI组(31例)；DFI>30%者为高DFI组(19例)。

1.2 治疗方法

1.2.1 精子采集及完整率检测

2组男性患者均清洁外阴并手淫取精，将精子置于无菌容器内，离心取其底部沉淀，加入COOK精子洗涤液3 mL洗涤2次并重新离心，调整精子密度涂片观察，将数滴吖啶橙染液对玻片进行染色5 min，运用40倍荧光显微镜观察精子整体情况并进行分析，正常的双链DNA精子呈绿色荧光，变性或断裂者为红色或橙色，统计各种颜色的比例，得出DFI。

1.2.2 ICSI过程

使用促性腺激素促进女方排卵，使用后检测卵泡发育，当卵泡直径>18 cm时取卵并在培养箱中继续培养。卵子成熟后进行ICSI操作：去除卵子卵丘结构，选择MⅡ卵进行显微注射，观察受精卵的受精情况、卵裂情况、并选择性移植优质胚胎，于移植半月后行尿常规检查，结果显示为阳性者20 d后行B超检查，观察子宫内是否有孕囊或胎心搏动，观察妊娠情况。

1.2.3 观察项目

观察并记录2组妊娠数、受精数、早期卵裂数以及优质胚胎数。以卵裂球数≥2为早期卵裂胚，第3天观察胚胎，卵裂球数≥胚胎6的Ⅰ级或Ⅱ级为优质胚胎。其中受精率=受精卵数/补救ICSI卵数×100%，卵裂率=卵裂数/受精总数×100%，优质胚胎率=优质胚胎数/卵裂数×100%，妊娠率=妊娠周期数/总移植周期数×100%。

1.3 统计学方法

使用SPSS 17.0软件进行统计、分析，计量资料采用t检验；计数资料采用卡方检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组一般资料对比

2组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

组别n男方年龄/岁女方年龄/岁睾丸体积V/mLFSH/(U·L-1)获卵数/个低DFI组3128.56±3.3625.85±3.0531.56±3.597.026±0.11410.15±0.171高DFI组1929.45±3.5226.16±3.1432.12±3.757.152±0.1259.462±0.158t1.2190.4350.8250.2180.587P0.2290.6650.4130.8280.560

2.2 2组ICSI相关结局比较

2组患者的受精率比较差异无统计学意义(P>0.05)，低DFI组早期卵裂率、优质胚胎率以及妊娠率显著高于高DFI组(P<0.05)，见表2。

表2 2组ICSI相关结局比较 %(n/n)

3 讨论

精子DNA损伤主要表现为DNA双链断裂以及单链形成，其发生机制与多种因素相关。精子发生过程中可因凋亡异常启动异常细胞凋亡程序，或因氧自由基过多导致与DNA结合，使DNA链的断裂[4]。精子DNA损伤是男性不育和女性受孕率降低的重要原因之一[5]。有研究[6]显示，人类胚胎早期发育受父本效应影响，其机制是启动微弱转录活性。ICSI主要通过将卵子吸入专业吸管中进行固定，于显微镜下将载有单一精子的空心针插入细胞之中并注射精子，此过程显示精子DNA损伤对受精的影响不大，但胚胎开始发育后，胚胎碎片将增多，阻滞卵裂球发育，导致胚胎发育不佳，妊娠率较低[7]。

精子DNA完整率是生殖医学研究领域的热点、难点。精子完整率是评价精子功能状态的重要指标，相比传统的精液常规、精子形态检查等更为稳定[8]。本研究结果显示，2组受精率差异不大，但低DFI组早期卵裂率、优质胚胎率、妊娠率均明显高于高DFI组(P<0.05)，提示精子DNA完整率与ICSI结局联系密切，当DFI>30%时妊娠率将大大降低，妊娠结局也受到一定影响，提示DNA碎片可影响胚胎发育，选取DFI较低者进行人工受精，可有效提高临床妊娠成功率。

但由于本研究受资料、地域环境、方法、操作过程等条件限制，可能会存在统计数据不准确或片面性等不足，还需进行大型专业研究来佐证。

[1] 何泳志,李大文,肖鑫,等.精子DNA完整率和精子顶体完整率及反应率对卵胞浆内单精子注射术结局的影响[J].广东医学,2015,53(5):729-731.

[2] 陆金春.精子DNA损伤的相关因素研究进展[J].中华男科学杂志,2015,21(8):675-680.

[3] Wu Y,Kang X,Zheng H,et al.Effect of paternal age on reproductive outcomes of intracytoplasmic sperm injection[J].PLoS One,2016,11(2):e0149867.

[4] 徐秀民,于德新,张志强,等.男性不育患者精子DNA损伤与非整倍体精子的研究[J].安徽医科大学学报,2013,56(11):1355-1359.

[5] Ni K,Spiess A N,Schuppe H C,et al.The impact of sperm protamine deficiency and sperm DNA damage on human male fertility:a systematic review and meta-analysis[J].Andrology,2016,4(5):789-799.

[6] 何泳志,李大文,成俊萍,等.精子DNA完整率、精子顶体完整率及反应率对补救卵泡浆内单精子注射术的影响[J].南方医科大学学报,2016,36(1):140-144.

[7] 肖鑫,李大文,冯刚,等.精子质量对不孕不育患者辅助生殖技术选择的指导作用[J].山东医药,2016,60(4):19-21.[8] Razi M,Sadrkhanloo R A,Malekinejad H,et al.Varicocele time-dependently affects DNA integrity of sperm cells:evidence for lower in vitro fertilization rate in varicocele-positive rats[J].Int J Fertil Steril,2011,5(3):174-185.

(责任编辑：罗芳)

2017-01-12

R714.8

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1009-8194(2017)07-0055-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.07.021