王招弟，吴好叶，严莉娅，姜玉瑶，牟滕慧，曾智勇＊，代振江

(贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

某猪场PCV2、PRRSV和附红细胞体多重感染的诊断

王招弟，吴好叶，严莉娅，姜玉瑶，牟滕慧，曾智勇＊，代振江

(贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

2017年4月以来，贵州某猪场的保育猪陆续开始发病，发病率约为30%，病死率约16%。据述该猪场发病猪主要症状为高烧（41 ℃以上）、气喘和腹泻等，将送检发病猪解剖后发现其组织器官中淋巴结肿大、出血、肾脏有囊肿及黄染现象，白斑肾特征明显，肺脏出血间质性肺炎特征明显，脾脏有瘀血梗死现象，其他脏器未见明显眼观病变。为了对其进行确诊，本实验室对上述送检病料进行了实验室检测，结果显示该猪场发病猪存在猪圆环病毒2型（PCV2）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和附红细胞体的多重感染。

1 材料

1.1 病料

系分别采自2头发病仔猪的组织病料（肝、肾、肺、淋巴结和脾脏等脏器）。

1.2 主要试剂

TaKaRa MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver.4.0、Prime-Script One Step PT-PCR Kit VER.2.0、DL2000皆购自大连宝生物公司；其他化学试剂均为国产分析纯。

2 方法

2.1 病料的处理及核酸的提取

对送检样品进行剖检，如图1所示。分别取适量剖检病猪的肝、肾、肺脏、淋巴结和脾脏进行碾磨匀浆，反复冻融3次后，12 000 r/min离心10 min，取上清，用TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.4.0试剂盒进行核酸的提取。

图1 解剖病例观察结果

2.2 附红细胞体检测

采集送检2头发病猪血液，分别涂片、处理后，于400倍镜下观察。

2.3 病原核酸检测

分别用本实验室设计的PCV2(上游引物：5’－TCGGAATT C A T G T C T A A C G G T T C T－3’，下游引物为：5’-ACGCTCGAGTTAGACTAAATGAAG－3’。)和PRRSV（上游引物：5′-CCCAAGCTTCCTTTTTATCACTTCGTAATGGTTTT-3′，下游引物：5′-GGTGGATCCACTCAGTAATTTATTTCATATGGA-3′）的特异性引物，以提取的核酸为模板，参……