王瑞瑞，潘佳秋，李丽疆，张永晨

(1.佳木斯市中心医院内分泌科，黑龙江 佳木斯154002；2.佳木斯大学附属第一医院内分泌科，黑龙江 佳木斯 154003；3.佳木斯市公安局刑事技术支队，黑龙江 佳木斯 154007)

糖尿病易感与MTHFR SNP rs1801133基因多态性的相关性①

王瑞瑞1，潘佳秋2，李丽疆2，张永晨3

(1.佳木斯市中心医院内分泌科，黑龙江 佳木斯154002；2.佳木斯大学附属第一医院内分泌科，黑龙江 佳木斯 154003；3.佳木斯市公安局刑事技术支队，黑龙江 佳木斯 154007)

目的：探讨糖尿病易感与MTHFR SNP rs1801133基因多态性的相关性以及胰岛素抵抗2型糖尿病、空腹血糖以及体重指数(BMI)与糖尿病的相关性的关系。方法：荧光原位杂交法检测MTHFR SNP rs1801133基因多态性，研究基因多态性与糖尿病易感的相关性、胰岛素患者体重指数、胰岛素抵抗合并高血压的关性。结果：BMI(kg/m2)胰岛素抵抗组为27.9±6.5，对照组为23.8±1.9，差异显著(P<0.01)；BMI及血糖浓度有一定关联，差异有显著性(P<0.05)；与胰岛素抵抗合并高血压具有一定关联，差异有显著性(P<0.05)。治疗前rs1801133 TT基因型治疗前空腹血糖明显高于基因型，12.4±2.3 、CC9.3±2.2差异有显著性(P<0.05)，合并用药后血糖浓度具有关联，CT基因型血糖高于其他两个基因型，TT与CT基因型比较差异有显著性6.35±0.55，5.9±0.57，(P<0.05)。结论：高体重指数是糖尿病胰岛素抵抗的高度危险因素； MTHFR SNP rs1801133 基因多态性可能与糖尿病易感及糖尿病合并高血压有关联；THFR SNP rs1801133基因多态性与胰岛素抵抗患者治疗前后血糖浓度有一定关联。

糖尿病易感；MTHFR SNP rs1801133；基因多态性

随着人们经济水平的提高和生活饮食方式的改变，基础代谢异常尤其是糖代谢异常对人类健康已经构成了主要的影响，糖尿病(Diabetes)发病率呈逐年上升的趋势[1]，在糖尿病及相关疾病高血压[2]、冠心病成因与治疗的探讨中，基因多态性对2型糖尿病形成与治疗的影响是医务工作者关心的主要课题之一[3]，已经有许多研究者获得了可喜的成果，JiazhongS等人对亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)基因多态性的相关性等进行研究[4]。Alharbi K K研究了rs934167 、rs1801123和rs1801278，结果显示rs934167 CC型空腹血糖低于CT+TT型，rs1801123TT型与空腹血糖相关，低于CT+CC型，rs1801278 CC型血浆胰岛素水平低于CT+TT型，表明基因多态性与空腹血糖相关和血浆胰岛素水平相关[5]。本实验拟选择MTHFR SNP rs1801133多态性与胰岛素抵抗2型糖尿病、空腹血糖以及体重指数(BMI)与糖尿病的相关性进行研究，为临床治疗2型糖尿病提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

例病组：入选2014-07～2015-04黑龙江东部地区汉族人群，在我市三甲医院内分泌科住院及门诊2型糖尿病患者。

a组：按照1999年WHO/ISH高血压诊断标准,选择坐位舒张压(DBP)90～109mmHg(1mmHg=0.133kPa)、收缩压(SBP)160～179mmHg，年龄、性别不限，具有2型糖尿病、血压高于标准的患者为糖尿病合并高血压组。体重指数(BMI)>25。

b组：按照HOMA胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)进行评价，HOMA-IR =(FPG mmol/L×Fins pmol/L)/22.5以HOMA-IR≥1.75作为胰岛素抵抗组[6]。

c组：选取在本院体检，无糖尿病史和高血压病史者作为健康对照组。

血液标本采集：使用一次性真空采血管(EDTA 抗凝，紫帽管)采集2～3mL静脉全血(不需空腹)，于 4℃或～20℃低温保存，保存时间不宜超过 24h。

1.2 仪器

TL-988实时荧光定量PCR，西安天隆科技仪器有限公司。HC-3017高速离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司。数显恒温水浴锅HH-S2，金坛市医疗仪器厂。移液枪Thermo，美国赛默飞世尔公司。掌式离心机，珠海博迈杰生物科技有限公司。

1.3 方法

采用荧光原位杂交法对以上分组人员的IRS 1 SNP rs2943650，MTHFR SNP rs1801133两个基因位点进行SNP检测。

1.3.1 基因多态性检测方法

①样品检测取 每份样品分别取150μL新鲜全血加入含有1000μL氯化铵溶液的Eppendorf 管中，颠倒混匀后室温放置5min，3000r/min(700g)离心5min，用移液器吸出上清液。在富集了白细胞的管中加入100μL耀金保，震荡混匀，室温放置20～30min。吸取本液1.0～1.5μL加入待测基因对应的耀金分试剂中，漩涡混匀，瞬时离心，上机检测；检测条件：95℃预变性600s；95℃变性30s，62℃复性75s，45或50个循环。在样品检测的同时，加测3种不同基因型的质控品作为对照。②对照组检测，方法同上。 ③基因型的判断：当一条基因荧光曲线值高于另一条基因荧光曲线，且两条曲线的St差值比杂合子要大，或者其中一条曲线的St值为-1，根据曲线颜色判断为野生或突变纯合子。当两条荧光曲线几乎同时升起，且趋势大致相同，达到平台期的时间也相近，两条曲线St值等于或小于质控品的杂合子St值之差，判断为杂合子[7]。并将检测的样品荧光曲线图与质控品曲线图进行比较。MTHFR SNP rs1801133荧光拟合曲线如图a。

图a MTHFR SNP rs1801133(C>T)荧光拟合曲线

1.4 统计学方法

采用统计学软件SPSS11.0软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为具有显著性。

2 结果

2.1 糖尿病易感的相关性

2.1.1 患者的一般情况

本实验对照组共收集样本90例，胰岛素抵抗患者样本108例，两组性别、年龄、体重指数(Body Mass Index，BMI)见表1。

表1 胰岛素抵抗组与对照组一般资料

两组性别年龄差异没有显著性(P>0.05)，其中胰岛素抵抗组体重指数明显高于对照组，差别有高度显著性(P<0.01)。

2.1.2 基因多态性与胰岛素抵抗的关系

分别对胰岛素抵抗组和对照组样本进行检测rs1801133基因多态性，计算各基因型的分布频率，检测见表2。

表2 rs1801133基因多态性与胰岛素抵抗的关系

rs1801133三种基因型分布频率差异有显著性(P<0.05)，b组CT基因型频率高于c组，而TT基因型低于c组。分层统计分析后，均具有显著性。

3.1.3 基因多态性与胰岛素抵抗患者BMI、空腹血糖关系

分别对胰岛素抵抗患者测定空腹血糖，按基因位点总结各基因型与糖尿病伴有 高血压患者BMI、空腹血糖关系，见表3。

表3 rs1801133基因多态性与高血压患者 BMI、空腹血糖关系

rs1801133位点各基因型患者的BMI指数TT>CT>CC，对应的空腹血糖浓度也呈递增趋势，既TT>CT>CC，差异有显著性(P<0.05)。

3 讨论

①本试验MTHFR SNP rs1801133(C>T)基因型的判断采用荧光拟合曲线法，方便、快捷、准确②本试验结果表明糖尿病组体重指数明显高于对照组，差别有高度显著性(P<0.01)。表明BMI体重指数是糖尿病的高度危险因素。③本实验表明MTHFR SNP rs1801133位点各基因型患者的BMI指数TT>CT>CC，对应的空腹血糖浓度也呈递增趋势，从基因型分布频率进一步说明BMI体重指数是糖尿病的高度危险因素。④本实验的胰岛素抵抗组选取的基因位点MTHFR SNP?rs1801133在CC、CT、TT三种基因型分布频率差异有显著性(P<0.05)，与文献报道相符。⑤在本实验中的前期实验研究也显示在对胰岛素受体底物MTHFR SNP1 rs2943650等位基因与高血压糖尿病的关系研究中得出，TT>TC>CC，具有显著性(P<0.05)。由此可推断此位点T等位基因变异对于2型DM合并高血压有指导意义，与文献报道相符。

[1]唐金玲.有胰岛素抵抗的2型糖尿病患者细胞因子及CRP测定的意义[J].中国现代 药物应用,2014,8(3):165-166

[2]佐璐,方芳,杨军,等.佳木斯地区健康人群与高血压患者CYP3A4 *1G 基因多态性分析[J].黑龙江医药科学,2015,38(1):7-9[3]丛培丽,方舟,荆红英,等.CYP2C19 *1*17基因多态性对氯吡格雷临床疗效不良反应影响的系统评价[J]. 黑龙江医药科学,2015,37(2):47-49

[4]JiazhongS,YnaehengX,JingeX,et al.Methylenetetrhaydrooflatereduetase Polymoprhismassoeiatedwithsusc Petibilitytoeoronaryheartdiseasein Chinesety Pe2dibaetie Patienis[J]Moleeularnad Cellular Endoerinology,2005，(229):95-10

[5]Alharbi K K, Khan I A, Abotalib Z,et al. Insulin receptor substrate-1 (IRS-1) Gly927Arg: correlation with gestational diabetes mellitus in Saudi women [J]. Biomed Res Int, 2014, 2014:146-495

[6]柳红芳,李洁,李慧萍,等.2型糖尿病胰岛素抵抗患者中医证候特征及血脂水平的临床研究[J].北京中医药大学学报,2009,16(1):1-4

[7]袁晓珍. 实时荧光PCR技术在丙型肝炎病毒基因型检测中的应用[J].广东医学,2011,32(5):16-18

王瑞瑞(1985～)女，黑龙江佳木斯人，在读硕士研究生，主治医师。

张永晨(1983～)男，黑龙江佳木斯人，法医师。E-mail：xiaoweiwei100@163.com。

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