倪雅楠+刘博

摘要：以龙爪槐（Sophora japonica f. pendula Hort.）叶片为材料，采用L16（45）正交设计试验，对SRAP-PCR反应体系中的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物和模板DNA用量5个因素进行优化，并确立适用于龙爪槐SRAP-PCR反应的最佳体系。结果表明，龙爪槐SRAP-PCR反应的最佳体系为反应总体积12.5 μL，Taq酶0.10 U、Mg2+ 3.0 nmol/L、dNTPs 2.5 nmol/L、正反向引物均为1.2 nmol/L、DNA 100 ng，其余体积用ddH2O补足。各因素水平变化对反应体系的影响影响大小依次为引物、模板DNA、Mg2+、dNTPs、Taq酶。用35个龙爪槐样品对优化体系进行验证，均得到条带清晰、多态性丰富的图谱，证实了该体系的稳定性。

关键词：龙爪槐；SRAP-PCR；正交试验；反应体系优化

中图分类号： S687.01文献标志码： A文章编号：1002-1302（2017）11-0019-03

相关序列扩增多态性（sequence related aplified polymorphism，SRAP），是美国加州大学蔬菜作物系Li等在芸薹属（Brassica）中开发出的，利用1对独特的引物设计方式实现对开放阅读框架ORFs进行扩增的标记[3]，适合于植物的遗传多样性研究、比较基因组学、遗传图谱的构建等领域研究。笔者首次采用SRAP技术对龙爪槐的遗传多样性进行分析，因此，须要确定其SRAP-PCR的最佳反应体系。

正交试验能综合各因素及其相互作用，快速找到影响因素的最佳水平组合，不仅效率高，且结果稳定可靠。正交试验已被广泛应用到菊花、荷花和番茄的优化体系中，并已确定最佳的反应体系[4-6]。

1材料与方法

1.1材料

供试材料为采自北京市35株龙爪槐的嫩叶（表1），硅胶

1.3.4龙爪槐SRAP-PCR最佳反应体系验证以35份龙爪槐的基因组DNA为模板，随机选取2个SRAP引物组合ME1-EM7、ME8-EM8，按照上述扩增及检验方法，对优化的龙爪槐SRAP-PCR反应体系进行检测。

1.4数据的统计与分析

采用Excel软件对试验结果进行统计和分析。……