胡宁宁，郭慧琴，李西良，孔令琪，武自念，张继泽，常 春，万东莉，臧 辉，任卫波(.中国农业科学院草原研究所,内蒙古 呼和浩特 0000； 2.中国农业科学院研究生院,北京 0008；.内蒙古农业大学生命科学学院,内蒙古 呼和浩特 0008)



植物生产层

羊草不同组织实时定量PCR内参基因的筛选

胡宁宁1,2，郭慧琴3，李西良1，孔令琪1，武自念1，张继泽1，常 春1，万东莉1，臧 辉1,2，任卫波1
(1.中国农业科学院草原研究所,内蒙古 呼和浩特 010010； 2.中国农业科学院研究生院,北京 100081；3.内蒙古农业大学生命科学学院,内蒙古 呼和浩特 010018)

为筛选羊草(Leymuschinensis)不同组织实时定量PCR(qRT-PCR)试验体系中的最佳内参基因，以羊草叶、茎、根、穗为研究材料，利用qRT-PCR技术分析TUA、TUB、18SrRNA、EF-1α、APRT、CYP、Actin和CBP20共8个常用候选管家基因的表达情况，并使用geNorm和NormFinder软件进行综合评价，以期筛选出羊草不同组织中最稳定的内参基因。结果表明，8个候选内参基因在羊草不同组织表达稳定性不同，其中，叶片中稳定性较高的内参基因是Actin；茎中稳定性较高的内参基因是EF-1a；根中稳定性较高的内参基因是APRT和18SrRNA；穗中稳定性较高的内参基因是TUB。本研究结果将为开展羊草功能基因的表达分析提供重要参考。

羊草；qRT-PCR；内参基因；组织

实时定量PCR(real-time quantitative PCR)是一种PCR技术，常用于基因表达检测，具有特异性强、灵敏度高、重复性好以及高通量等优点[1]，已成为当今植物分子生物学领域检测基因表达与转录组分析等研究的重要方法之一[2]。qRT-PCR包括绝对定量和相对定量两种方式，常用到的是相对定量。在相对定量检测中，通常会选择内参基因来校正数据，用来消除试验过程中如RNA提取质量、反转录cDNA效率及PCR反应条件可能带来的差异，使目的基因在试验样品中表达数据更准确。……