李敏 尹浩 伊淑平 孙甜 张忠一 施文浩 王爱卿

超高效液相串联质谱仪检测蔬菜中涕灭威及其代谢物的方法研究与探讨

李敏 尹浩 伊淑平 孙甜 张忠一 施文浩 王爱卿

涕灭威又名神农丹，是一种氨基甲酸酯类杀虫剂、杀螨、杀线虫剂，属于高毒农药，禁止蔬菜、果树、茶叶、中草药材上使用。涕灭威施用后能够很快氧化成为仍具生物活性的涕灭威亚砜和涕灭威砜。

目前农业检测部门主要使用《NY/T761-2008蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》中液相色谱仪和柱后衍生设备检测涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜，使用《GB/T20769-2008水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》可以检测涕灭威砜。本试验研究了使用液相色谱-串联质谱实现快速简便检测涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜，并以此为例探讨农残多残留检测的注意事项。

一、材料与方法

1、仪器与试剂

仪器：Waters UPLC Xevo TQ超高效液相串联质谱仪、冷冻离心机、T18均质机

试剂：乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、甲酸（色谱纯）、水（应符合GB/T6682一级水指标）、冰乙酸、氯化钠、分散固相萃取净化管（内含25毫克PSA，7.5毫克GCB，150毫克MgSO4）。

标准品：涕灭威(农业部环境质量测试中心,1毫克/毫升)、涕灭威砜(农业部环境质量测试中心, 1毫克/毫升)、涕灭威亚砜(农业部环境质量测试中心,1毫克/毫升)

2、样品处理

⑴提取

称取已粉碎10.00克试样至50毫升离心管中。加入15毫升酸化乙腈（即0.1%乙酸乙腈），10000rpm/分钟匀浆1分钟。加入3克NaCl后，剧烈振荡1分钟，让块状试样分散开来，然后10000rpm离心5分钟。

⑵净化

取1毫升上清液转移至2毫升分散固相萃取净化管中，剧烈振荡1分钟，5000rpm离心5分钟，取上清液300微升，加入超纯水定容至1毫升，混匀，过0.22微米滤膜，上机。

3、仪器条件

液相部分设置：色谱柱：BEH C18（50毫米×内径2.1，粒径1.7微米）；流动相：A相0.1%甲酸甲醇；B相5mM乙酸铵0.1%甲酸水；流速0.3毫升/分钟；进样量：5微升，柱温30℃。液相梯度设置：见表1。

质谱设置：电离模式：ESI+；扫描方式：MRM；离子源温度150℃；脱溶剂温度500℃；毛细管电压3200V。

4、质谱调谐参数设置

通过比较相应强度，确定母离子后，进行调谐，确定多反应监测参数，见表2。

5、计算公式

式中：W-蔬菜中农药残留量（毫克/千克）

C-标准曲线查得样品上机浓度（纳克/毫升）

V1-最终定容体积（毫升）

V2-乙腈提取液体积（毫升）

m–称样质量（克）

二、结果与讨论

1、线性关系和定量限

配制2、5、10、20、50纳克/毫升浓度基质标准溶液，上机，标准曲线见图1，涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜线性相关系数r分别为，0.9997、0.9992、0.9997；三种目标物质谱出峰时间为，5.42分钟，2.04分钟，1.71分钟。根据三种目标物2纳克/毫升出峰情况和信噪比，定量限为0.01毫克/千克，出峰情况见图2。

2、样品分析及加标回收率试验

按照前处理步骤和仪器设置条件进行标准添加检测，在10微克/千克加标量下，从表3可以看出，试验重复性好，三种目标物平均回收率为93.8%、91.8%、90.2%，4次检测RSD分别为6.2%、1.9%、3.3%。

表1 液相梯度设置表

表2 多反应监测参数设置表

表3 回收试验情况表

图1 涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜标准曲线

图2 2纳克/毫升涕灭威砜、涕灭威、涕灭威亚砜选择离子质量色谱图

三、结论

该方法使用的简便、快速，重复试验数据稳定，线性关系良好，涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜线性方程分别是Y=22.81x-2.56，Y=814.36x+ 8.72，Y=169.63X+8.32。在做蔬菜中农药多残留检测时应注意以下几点：一是选择响应高的离子对，例如涕灭威母离子可以选择加NH4+峰分子量208，也可以选择加Na+峰分子量213，通过实际调谐比较加Na+峰响应高并且较稳定。二是注意溶剂效应，由于流动相初始为10%甲醇水体系，上机样品为30%乙腈水体系，本试验显示如果目标物出峰在1.5分钟以内，溶剂效应较为明显，所以需要合理调整流动相梯度和进样量，抑制溶剂响应。三是基质效应干扰，本试验采用基质加标作为定量依据，防止基质效应干扰。四是本试验液相梯度设置同样适用于超高效液相质谱测定蔬菜中农药多残留检测。

(作者单位：沧州市农产品质量检验监测中心)