何晓静，钟毅欣，蒋 伟,马绍勇,赵 静，卓 颖*

(1.重庆医科大学超声影像学研究所，重庆医科大学附属第二医院，重庆400010)

(2.重庆市纳米材料及传感技术工程实验室，西南大学化学化工学院，重庆400715)

基于目标物引发的滚环扩增信号放大策略构建电致化学发光传感器用于m icroRNA检测

何晓静1*，钟毅欣1，蒋 伟1,马绍勇2,赵 静2，卓 颖2*

(1.重庆医科大学超声影像学研究所，重庆医科大学附属第二医院，重庆400010)

(2.重庆市纳米材料及传感技术工程实验室，西南大学化学化工学院，重庆400715)

该实验设计了基于目标物循环引发滚换扩增（CI-RCA）的电致化学发光（ECL）传感器。首先，设计了由结合区域与多鸟嘌呤区域两部分组成的哑铃型挂锁探针作为滚环扩增模板。该模板中的结合区域能够与目标miRNA以及固载电极表面的引物杂交形成三元“Y”形结构，进而引发滚环扩增，产生连环的多胞嘧啶序列的单链DNA。当滚环扩增完成对模板的一次复制时，目标miRNA被置换下来，进而协助下一条引物与模板的结合，引发下一个滚环扩增，生成大量的引物3端延伸出的多胞嘧啶DNA单链。基于C-Ag-C的配位作用，Ag+被固定在电极表面，进而增强过硫酸根体系的ECL信号。因此，随着目标miRNA浓度的增加，ECL信号强度越高。实验结果表明该传感器在1.0 fmol/L～1.0 nmol/L浓度范围内对miRNA有良好的线性响应。

电致化学发光；滚环扩增；miRNA

0 引言

滚环扩增 （rolling circle amplification，RCA）是新近发展起来的一种恒温核酸扩增方法[1]。以环状DNA为模板，通过一个短的DNA引物（与部分环状模板互补），在酶催化下将dNTPs转变成单链DNA，此单链DNA包含成百上千个重复的模板互补片段。……