张梦媛，庄 鲁，万小娟，束 刚，王丽娜，朱晓彤，高 萍，王松波，江青艳

(华南农业大学 动物科学学院，广东 广州 510642)

不同浓度氨基酸对仔猪原代肝细胞尿素循环的影响

张梦媛†，庄 鲁†，万小娟，束 刚，王丽娜，朱晓彤，高 萍，王松波，江青艳

(华南农业大学 动物科学学院，广东 广州 510642)

【目的】研究不同浓度的氨基酸对仔猪原代肝细胞尿素循环的影响及其机理。【方法】5日龄仔猪门静脉灌流后从中分离纯化出肝细胞并进行培养，在培养基中添加不同浓度的氨基酸(分别为猪血液中氨基酸生理浓度的1、2和4倍)，24 h后收集上清和细胞。用比色法检测上清中尿素、底物氨和细胞中氨的浓度以及谷氨酰胺酶(Glutaminase, GLS)和谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase, GS)的活性，实时荧光定量PCR法检测细胞中氨甲酰磷酸合成酶1(Carbamyl phosphate synthetase 1, CPS1)、精氨基琥珀酸合成酶(Argininosuccinate synthetase, ASS)、精氨琥珀酸裂解酶(Argininosuccinate lyase, ASL)、鸟氨酸氨甲酰转移酶(Omithine transcarbamylase, OTC)和精氨酸酶(Arginase, ARG)等尿素循环相关酶基因mRNA的表达。【结果】4倍氨基酸组显著提高了仔猪原代肝细胞培养上清中氨和尿素的浓度，增强了细胞中GLS的活性。荧光定量PCR结果表明，4倍氨基酸组显著提高了细胞中CPS1、ASS和ASL等基因mRNA的表达。1.0和2.0 mmol·L–1的NH4Cl显著促进细胞尿素的合成。【结论】在仔猪原代肝细胞中，高浓度氨基酸可以通过提高GLS的活性等途径加速氨的积累，促进CPS1、ASS、ASL等尿素循环相关酶基因mRNA的表达，从而促进尿素的生成。

仔猪；原代肝细胞；氨基酸；尿素循环；氨；基因表达；酶活性

尿素循环本质上是一个将神经毒素氨转化为水溶性尿素的过程，是精氨酸、鸟氨酸和瓜氨酸的内源性生产的唯一来源，也是清除蛋白质周转造成的废氮的主要机制[1]，从而避免高氨血症的发生。……