李向梅，刘琼波，白宏芬，刘增军，杨彝华

（楚雄州林业科学研究所，云南 楚雄 675005）

块菌与板栗培育菌根苗技术探讨*

李向梅，刘琼波，白宏芬，刘增军，杨彝华**

（楚雄州林业科学研究所，云南 楚雄 675005）

印度块菌（Tuber indicum Vittadini）、夏块菌（Tuber aestivum Vittadini） 和白块菌（Tuber panzhihuanense Deng&Wang）是经济价值较高的菌根食用菌。通过对印度块菌、夏块菌和白块菌与板栗（Castanea mollissima Blume）合成菌根苗的技术进行探讨，结果表明使用印度块菌、夏块菌和白块菌孢子液接种板栗树苗，10个月后均能形成大量外生菌根。菌根苗移栽后，接种夏块菌的板栗苗苗高最高，与接种白块菌和印度块菌的板栗苗相比高差异显著，但接种白块菌的板栗苗与接种印度块菌的板栗苗相比苗高差异不显著。接种夏块菌的板栗苗与接种白块菌板栗苗间地径差异不显著，二者与接种印度块菌的板栗苗间地径差异均显著。

印度块菌；夏块菌；白块菌；板栗树；无菌苗；共生真菌

印度块菌 （Tuber indicum Vittadini）、夏块菌（T.aestivum Vittadini） 和白块菌 （T.panzhihuanense） 均属于子囊菌纲 （Ascomycets） 块菌目（Tubrales） 块菌科（Tuberaceae） 块菌属（Tuber），是一类经济价值和食用价值都较高的菌根食用菌，成熟时香味很浓，具有广阔的开发前景[1]。块菌能与多种树木共生，在森林生态系统中占据重要地位，因其生长的特殊性，以及采挖时对菌塘及生态环境的严重破坏，造成产量急剧下降，仅靠野生生产，产量已不能满足市场需求[2]。通过合成菌根苗造林来实现块菌半人工栽培，是块菌培育的有效措施。目前已有一些研究报道[3-7]，苏开美等[5]报道使用印度块菌、夏块菌孢子液接种化香树苗（Platycarya strobilacea Sieb．et Zucc．），第3个月发现已形成根尖淡乳色，基部淡黄色、黄褐色的外生菌根。张小雷等[6]报道使用印度块菌孢子液接种园叶杨树苗（Populus bonatii Levl） 后，第1个月至第2个月可形成淡黄色、黄褐色外生菌根。

楚雄州是野生块菌主产区之一，为保护块菌资源，促进产业发展，我们借鉴国内外人工培育块菌技术的成功经验，进行块菌的仿生态栽培研究，探讨印度块菌、夏块菌、白块菌与板栗的共生关系，培育块菌菌根苗，以期为块菌菌根苗的培育技术提供指导。

1 材料与方法

1.1 半无菌苗的培育

1．1．1 共生树种选择

选择与块菌具有共生关系的板栗（Castanea mollissima Blume）进行接种试验。

1．1．2 基质准备

将蛭石、草炭以体积比为1:1混合拌匀，加入适量水拌潮湿，含水量约28%，即基质捏起成团，松手后散开为宜，高温高压（121℃、110 kPa）灭菌2 h，冷却备用。

1．1．3 育苗盘和盆钵消毒

育苗盘和盆钵均用5‰高锰酸钾溶液浸泡40 min，取出后用无菌水冲洗3次。

1．1．4 育苗

2010年9月至10月，板栗种子采用水选法除去空瘪种子后放入30%双氧水中灭菌30 min，捞起用无菌水冲洗后播入盛有灭菌基质的盆钵或育苗盘中，使用冷却后的开水或蒸馏水浇灌，置于温室中培育。2011年开春，当幼苗主根系长5 cm～10 cm，侧根发达后开始接种。

1.2 接种前准备

1．2．1 材料准备

印度块菌 （Tuber indicum）、夏块菌 （Tuber aestivum）和白块菌（Tuber panzhihuanense） 成熟子实体，酒精灯1盏，小刀2把，剪刀2把，塑胶片，乳胶手套10双，30倍放大镜1个。

1．2．2 接种液的配制

果汁机用75%酒精擦拭后，无菌水冲洗，反复3次。成熟块菌用自来水洗净后，再用75%酒精擦拭干净，无菌解剖刀切成小块，放入准备好的果汁机中，加入适量无菌水，开启果汁机搅碎，加无菌水稀释成10%悬浮液，倒入已灭菌的瓶中，密封，置4℃冰箱保存备用。

1．2．3 接种基质配制

经过灭菌的基质中加入适量水拌潮湿，加石灰调pH7～7．5，使基质捏起成团，松手后散开为好。

1．2．4 胶片和育苗盘准备

根据育苗盘穴的大小，将透明胶片剪成适合的大小，置入双氧水中灭菌40 min，取出，灭菌水冲洗干净备用。育苗盘消毒同1．1．3。

1.3 接种

将配制好的基质平铺于经过灭菌的胶片上，取出半无菌苗，根部置于基质中部，使根充分伸展开。

用吸管吸取10 mL的孢子悬浮液，淋于根上包好胶片，胶片松紧适合，使基质不会散落。

依次放入准备好的育苗盘内，浇适量的蒸馏水，置于温室内培养。注意水不能浇太多，否则会冲走块菌孢子。

1.4 接种后管理

接种后的管理主要是控制基质湿度，适当通风、透气，保持一定的温度和空气湿度。

1．4．1 浇水

培养期间使用冷开水或蒸馏水浇灌，保持基质湿润。

1．4．2 温度

夏季需遮阴处理，温室内保持平均温度18℃，最高温度不超过32℃，最低不低于1℃。

1．4．3 湿度

温室内平均湿度64%，最大湿度不超过96%，最小湿度不低于34%。

1.5 菌根检验

1．5．1 菌根检验时间

苗木接种后1个月～2个月开始进行检查，每隔1个月检查1次。

1．5．2 菌根检验步骤

75%酒精擦拭双手3次，一手捂紧包裹苗的胶片轻轻转动，取出胶片包裹的菌根苗置于另一手内，胶片松开，用30倍放大镜观察外露根系的菌根发育和形态，感染其他杂菌的菌根苗需立即移除，以免扩大污染。

1．5．3 菌根苗出栽

菌根苗于2013年7月种植于昆明小哨，栽植密度4 m×4 m。

1.6 菌根拍照和数据分析

将典型的外生菌根用无菌小镊子取下，在显微镜下用毛刷刷掉泥土，蒸馏水清洗干净，将根系直接放在体式显微镜下观察菌根形态，在80倍下观察外延菌丝，记录其特征并照相。菌根苗数据采用SPSS 17．0软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 菌根特征

2011年4月接种白块菌190株，接种夏块菌94株，接种印度块菌1 400株。于当年7月白块菌检测到菌根，印度块菌检测到少量菌根，夏块菌未检测到。2012年2月，印度块菌、夏块菌、白块菌均检测到大量菌根。解剖镜下拍摄的菌根形态，印度块菌与板栗形成具刚毛的菌根（图1A），夏块菌与板栗形成梳子状的菌根（图1B），白块菌与板栗形成顶端膨大如蝴蝶触角状的菌根（图1C）。

2.2 菌根苗出栽

2015年11月，分别观测3种块菌各48株菌根苗苗高（cm）、地径（mm），观测结果见表1。

图1 3种块菌与板栗形成的菌根形态Fig．1 Mophology of mycorrizal seeding of Castanea mollissima with 3 kinds of Tuber

表1 3种块菌与板栗合成菌根苗参数Tab．1 Parameters of mycorrizal seedling of Castanea mollissima with 3 kinds of Tuber

从表1中可看出，3种块菌与板栗合成菌根苗单因素方差分析结果显示，板栗苗苗高差异显著（F= 5．14，df=2 138，P＜0．001），板栗地径差异显著（F= 4．56，df=2 138，P＜0．05）。接种夏块菌的板栗苗苗高最高为117．50 cm，接种白块菌的板栗苗居中为99．60 cm，接种印度块菌的板栗苗最矮为94．04 cm；接种夏块菌的板栗苗与接种白块菌和印度块菌的板栗苗苗高差异显著（P＜0．05），但接种白块菌的板栗苗与接种印度块菌的板栗苗相比平均苗高差异不显著（P＞0．05）。接种夏块菌的板栗苗平均地径最大为25．59 mm，接种白块菌板栗苗平均地径次之为25．57 mm，二者差异不显著，接种夏块菌和白块菌的板栗苗平均地径与接种印度块菌的板栗苗平均地径间差异均显著（P＜0．05）。因此，3种块菌均可用于与板栗苗合成外生菌根苗。

3 结论

据报道，块菌可以与化香树、圆叶杨树等形成外生菌根[3-7]。本研究结果表明，块菌可以与板栗形成较好的外生菌根。板栗属壳斗科（Fagaceae）栗属（Castanea Mill．）植物，作为印度块菌、夏块菌和白块菌的寄主，在块菌栽培研究中具有一定的应用价值。

[1]胡弘道．块菌（松露）之培育与食谱[M]．台北：华香园出版社，2010．

[2]苏开美．云南永仁县万马乡块菌生态环境调查研究[J]．中国食用菌，2005，24（4）：12-13．

[3]胡弘道，苏开美，柴红梅，等．夏块菌与青刚栎形成外生菌根形态的研究[J]．云南植物研究，2011，32（6）：489-494．

[4]胡弘道．块菇与林木共生关系之研究(II)4号块菇之特征及其与夏块菇之菌根合成[J]．台大实验林研究报告，1987，1（3）：17-26．

[5]苏开美，李树红，杨丽芬，等．印度块菌、夏块菌与化香树合成菌根苗技术初探[J]．中国食用菌，2012，31（3）：10-12．

[6]张小雷，李树红，苏开美，等．印度块菌与圆叶杨合成菌根苗技术初探[J]．中国食用菌，2011，30（6）：18-20．

[7]GENG Li-ying,WANG Xiang-Hua,YU Fu-Qiang,et al．Successful mycorrhizal synthesis of Tuber indicum with two indigenous hosts and their recognition[J]．Acta Botanica Yunnanica,2009,Suppl(XVI):29-36．

Techniques for the Synethesis of Mycorrizal Seeding of Castanea mollissima with Tuber

LI Xiang-mei,LIU Qiong-bo,BAI Hong-fen,LIU Zeng-jun,YANG Yi-hua
(Forest Institute of Chuxiong Prefecture,Chuxiong 675005,China)

Tuber indicum,T.aestivum and T．sp．are mycorrizal mushrooms with high economic value．In this paper,the production technique for the mycorrhizal seedling of Castanea mollissima with T.indicum,T.aestivum and T．sp．was studied．The results showed that T.indicum,T.aestivum and T．sp．formed large number of mycorrizal seedlings on the chestnut seedlings after ten months inoculated．After transplanting seedlings,the seedling inculated with T.aestivum was the higest,there was significant difference with the seedlings inculated with T.indicum and T．sp．,but there was no significant difference with the seedlings inculated with T．sp．and T.indicum．It had no significant difference on ground diameter with the seedlings inculated with T.aestivum and T．sp．,but they had significant difference on ground diameter with the seedlings inculated with T.indicum．

Tuber indicum;Tuber aestivum;Tuber sp．;Castanea mollissima;semi-aseptic seedling;symbiotic fungi

S646.9

A

1003-8310（2017）04-0032-03

10．13629/j．cnki．53-1054．2017．04．008

国家林业局科技推广示范项目项目（2009TQYN004）。

李向梅（1974-），女，本科，林业工程师，主要从事野生食用菌保育及规范采收实用技术研究及推广示范。E-mail: 1344421460＠qq．com

**通信作者：杨彝华（1969-），女，硕士，正高级工程师，主要从事野生食用菌为主的林下资源开发利用研究及技术推广示范。E-mail: yangyh_009＠163．com

2017-05-11