徐红贞　万萍　单兰君

摘要：候鸟分子生物学研究的前提是获得质量好的基因组DNA，采用标准血液DNA提取试剂盒和苯酚-氯仿法分别对采自鄱阳湖的部分候鸟血液进行基因组DNA提取。结果表明，这2种标准方法所获得DNA质量均不合要求，因此在苯酚-氯仿法基础上开展优化试验，得到优化后的苯酚-氯仿法提取条件为组织裂解液500 μL、血液样品20 μL、蛋白酶K 10 μL和酶解时间8 h，在此条件下能分离到高质量的基因组DNA。

关键词：候鸟基因组；分离；优化

中图分类号：Q959.7；Q812 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）11-2145-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.11.038

Abstract： The premise of migratory bird molecular biology is to obtain high purity and good quality genomic DNA， and the DNA extraction method of common species is not suitable for the isolation and extraction of DNA from migratory birds. The first uses standard blood DNA extraction kit and classical phenol chloroform method genomic DNA blood migratory birds in Poyang Lake were extracted. The results showed that the two standard methods for the quality of DNA are undesirable. Therefore， the optimization test in the classical phenol chloroform method carried out， found that the optimized phenol chloroform method（tissue lysates 500 μL， blood samples 20 μL， proteinase K 10 μL and enzyme hydrolysis time 8 hours），the high quality genomic DNA could obtain under the condition.

Key words： birds genome； separation； optimization

候鸟分子生物学研究的关键是获取高质量和完整的基因组DNA，目前提取基因组DNA的方法较多，实验室提取DNA的方法主要包括苯酚-氯仿法和试剂盒法。试剂盒法是利用核酸在一定浓度溶液条件下吸附固相介质（二氧化硅膜）的原理，在实际操作中采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异地结合在硅基质离心吸附柱上，通过几次洗涤除去杂质，最后采用低盐缓冲液洗脱获得高纯度DNA。试验中不使用苯酚和氯仿等有毒溶剂，也无需乙醇沉淀等步骤。这种方法的优点是操作简便，耗时短，但其存在离子残留量大的问题，对后续PCR扩增反应尤其是测序反应等造成严重干扰[1]。苯酚-氯仿法是提取基因组DNA最经典方法，其主要原理是根据在水相与酚/氯仿有机相中DNA和杂质的溶解度存在差异而进行分配，通过离心分离出蛋白质等杂质，再利用乙醇沉淀洗涤DNA，最后获得DNA。该方法成本低，所用试剂均为常用试剂，提纯效率高，但不足之处是耗时费力、核酸降解程度大，且所用试剂苯酚和氯仿等具有一定毒性[2]。……