滕丽娟

广西中医药大学赛恩斯新医药学院 广西壮族自治区南宁市 530222

补体的制备及其经典激活途径在实验教学中的应用

滕丽娟

广西中医药大学赛恩斯新医药学院 广西壮族自治区南宁市 530222

目的：探讨如何制备新鲜豚鼠血清作为补体的方法及补体经典激活途径在实验教学中的应用。方法：对豚鼠进行心脏采血，血液放放置37℃水浴箱30min析出血清，收集带有少量红细胞的血清离心，取上清液从而获得含有大量补体的豚鼠血清。颗粒抗原（2%绵阳红细胞）与相应抗体(溶血素）特异结合产生的免疫复合物可激活补体的经典途径从而使绵羊红细胞细胞溶解。绵羊红细胞溶血实验检测了补体被激活后产生的溶血作用。结果：同时具备有抗原，相应抗体，补体的试管发生绵羊红细胞溶血现象。结果显示阳性。结论：豚鼠血清做补体的制作方法简单，快速。血清含补体成分高，补体活性强。用于实验制作成本低，实验效果显著，可大量使用于相关高校的免疫学基础实验教学。

补体；血清制备；溶血实验；实验教学

补体（complement,C)系统是广泛存在于人和脊椎动物新鲜血清、组织液和细胞膜表面具有多种调控机制的蛋白酶促反应系统，由30余种可溶性蛋白和膜结合蛋白组成，激活后具有多种生物功能。生理情况下，血清中的补体成分多以无活性的酶前体形式存在。只有当激活物存在时，补体各成分才可依次被激活形成一系列级酶促反应，最终出现溶细胞等效应。目前研究发现补体激活的主要途径有：经典途径，凝集素途径和旁路途径。本文通过对豚鼠进行心脏采血，离心血液取血清作为补体，应用补体激活的经典途径方式验证补体激活后的溶血作用。实验包括实验动物的选择，动物如何抽血，血清分离和溶血实验操作等进行探讨。

1 主要试剂与器材

1.1 抗原，抗体，补体

2%绵羊红细胞(2%SRBC)、溶血素、豚鼠血清（自制）。

1.2 试剂与器材

生理盐水、试管、离心机、试管架、注射器、无菌培养皿、吸管等。

2 实验方法

2.1 补体的制备

2.1.1 动物的选择

研究发现豚鼠血清补体含量都高于其他动物，而且豚鼠体型较小，性格温顺比较容易控制。因此本实验选择豚鼠做为实验动物。

2.1.2 心脏采血

需两人协作，一人将豚鼠固定仰卧。采血者用左手在胸骨左侧触摸到心脏跳动最快，最有节凑的地方。确定好部位后用碘伏消毒，用针头刺入心脏。泵血后应迅速取血，以防豚鼠挣扎针头脱落。如果针头已刺入心脏还没有泵血出来时，可将针头慢慢退出一点即可。失败时应拔出重新操作，切记针头在胸腔内摆动，以防损伤心脏和肺致动物死亡。一般一只豚鼠可采血10ml。

2.1.3 分离血清

采到的血液不能抗凝，置于无菌75mm培养皿中盖好。室温静置或置于37℃环境中促凝。待析出血清后收集血清放入离心管进行离心（一般离心3000r/ min,15min)，收集上清液。所得到上清液即为含有大量补体的血清。

2.2 溶血实验检测补体激活的生物作用

此实验是医学基础学科必须掌握的基础技能之一，是临床上测定人体血清总补体活性，了解机体的免疫水平的一个验证方法。阐明了某些疾病的发病机理，并作为有关疾病的诊断和观察病情变化的一项重要指标。作为医学生掌握这项实验技术是非常有必要的。我们实验使用的颗粒抗原是新鲜2%绵羊红细胞，抗体溶血素做1:50稀释，新鲜豚鼠血清做补体按1:15稀释，生理盐水做平衡对照。按照表1的要求添加试剂。

表1

3 实验结果

本实验是利用对比，排除的验证方法。发现只有同时存有绵阳红细胞，抗绵羊红细胞抗体（溶血素），补体的情况下才出现红细胞溶解现象。验证了只有抗原（绵羊红细胞）与相应抗体（溶血素）特异结合形成抗原抗体复合物（免疫复合物），才能激活补体的经典途径而使绵羊红细胞溶解，发生溶血现象。即只有第一管发生溶血，结果显阳性。其它管均不符合激活补体经典途径的条件而无法发生溶血。

4 实验结论

本实验为综合性实验，涉及学生要自己选择动物，自己抽血取血清，自己通过实验验证结果。实验中使用到一些简单又常用的仪器设备，充分体现了学生的基础实验操作的综合能力。有利于培养学生动手能力，思考能力。另外，豚鼠血清做补体的制作方法简单，快速。血清含补体成分高，补体活性强用于实验制作成本低，实验效果显著，可大量使用于相关高校的免疫学基础实验教学。

[1]郭立军,王晶,甚元英,等.三种免疫血清制备方法的比较[J].大理学院学报,2004,3(05):7-8.

[2]梁莹.山羊红细胞在补体溶血试验中的应用[J].咸宁医学院学报,1996,10(03)140.

滕丽娟（1983-），女，壮族，广西壮族自治区南宁市人。大学本科学历。助教职称。主要研究《微生物与免疫学》的实验教学与实验方法改进的方向，特别是医学类三本院校的基础医学实验教学改革和实验改进工作，寻求出更适合医学学生的实验教学方案。